本キットには強力な溶解バッファーが付属しており、サンプル（細胞、マウスの尾、マウスの耳、マウスのつま先、筋肉など）を迅速に溶解してゲノムDNAを遊離させることができます。溶解液は精製することなくPCR反応系に直接添加できるため、操作が簡単です。また、本キットはサンプル量が少なく、マウス組織5mgまたはマウスの尾1～5mmで実験が可能です。

コンポーネント

ストレージ

19697-A（溶解液）は、 2～8℃の場合 1年間。複数回使用する場合は、交差汚染を防ぐため、別々の包装に入れて冷凍してください。 19687-B（停止液）は、 -25～-16℃の場合 1年。

説明書

マウスゲノムDNAのリリース

1. 1.5 mL 遠心管*に 5 ～ 10 mg の動物組織または 1 ～ 5 mm のマウスの尾を切り取ります。
2. 上記の遠心管に 90 μL の Buffer ML を加え、サンプルに溶解液が完全に浸透するように軽くボルテックスし、軽く遠心します。
3. 恒温インキュベーター**内で95℃で15分間インキュベートします。
4. 10 μL の Buffer MT を加え、軽く振って混ぜ、溶解を終了します。
5. オプション手順: 12000 rpm で 2 分間遠心分離します。
6. 上清を新しい遠心管に移し、4°C または -20°C で保存するか、上清を直接取り出して次の PCR 増幅に使用します。

* 溶解反応をよりスムーズに進めるために、組織は可能な限り細かく切り刻む必要があります。

**PCRのほとんどのニーズには、95℃で15分間のインキュベーションで十分です。より多くのDNAが必要な場合、またはサンプルの溶解が困難な場合は、時間を30分まで延長できます。組織ブロックを完全に溶解する必要はなく、残留物は後続の遠心分離ステップで除去できます。

細胞ゲノムDNAの放出

48ウェルプレートでトランスフェクション細胞を3日間培養し、細胞密度が約70,000個/ウェルに達した後、培地を可能な限り完全に除去します。その後、MLバッファーを各ウェルに直接90μLずつ添加し、ピペットで分注します。全てを96ウェルPCRプレートに移します。PCR装置で95℃、5～15分間処理した後、冷却し、MTバッファー10μLを加え、均一かつ十分に吹き付けます。高忠実度酵素（カタログ番号10164）またはTaq酵素を使用し、PCR反応系50μLごとに細胞ライセート0.5～2μLを加えてPCRを行います。

図 1. 19697 で処理した細胞溶解物を使用した直接 PCR。

注記

1. この製品は研究用途にのみご使用いただけます。
2. 安全のため、ゴーグル、白衣、使い捨て手袋を着用して作業してください。
3. サンプル間の交差汚染を避けるため、各サンプル採取後、採取器具の端またはサンプルに直接接触する部分を2%次亜塩素酸ナトリウム溶液に浸し、数回洗浄した後、残留液を清潔なペーパータオルで拭いてから再度使用する必要があります。試験の利便性を考慮し、複数の採取器具を用意し、使用後に均一に洗浄することで、各サンプルが汚染のない採取器具で採取されることが保証されます。
4. 新鮮な動物組織の使用をお勧めします。長期凍結組織の場合は、凍結と解凍の繰り返しはできる限り避けてください。繰り返し行うとテンプレートが劣化し、PCR効率に影響を及ぼします。

文書:

安全データシート

19697_MSDS_HB250721.PDF

マニュアル