AapCas12bヌクレアーゼ（C2c1とも呼ばれる）は、好熱菌アリシクロバチルス・アシドフィルスに由来する、tracrRNA:crRNA（またはsgRNA）を介したDNAエンドヌクレアーゼである。標的の二本鎖DNA（dsDNA）にPAM（TTN）配列が存在する場合、標的のdsDNAを特異的に切断し、二本鎖切断を引き起こして粘着末端を生成する。AapCas12bは、PAM配列とは無関係に、一本鎖DNA標的を特異的に切断することができる。二本鎖および一本鎖DNA標的の両方が、AapCas12bのトランス切断活性を活性化することができる。AapCas12b酵素がsgRNAおよび標的DNAと三元複合体を形成すると、非特異的ssDNAトランス切断活性が活性化され、システム内の任意のssDNA配列を切断する。 AapCas12b の最適な切断反応温度は 60 ℃ であり^、 AacCas12b よりも耐熱性が高く、等温増幅/CRISPR-Cas 検出システムを開発するための LAMP との使用に適しています。

特徴

広い反応温度範囲：37 ～ 65 ^℃の温度範囲で切断活性を示す

ヌクレアーゼ残留が少ない：エキソヌクレアーゼ、ニッカーゼ、RNaseが残留しない

シス切断活性：in vitroにおける二本鎖DNAの高効率切断

トランス切断活性：核酸検出に適した高いトランス切断活性

アプリケーション

CRISPR/Cas遺伝子編集

CRISPR/Casシステムに基づく診断と検出

等温核酸増幅技術（RPAおよびLAMP）などと組み合わせたその他の検出アプリケーション

仕様

コンポーネント

船のpingと保管

この製品は-25〜-15℃で2年間保管する必要が^あります。

数字

形 1. AapCas12bヌクレアーゼのシス切断活性の検証

注： PAM配列を有するターゲットdsDNA、sgRNA、Cas12b、および1 ×反応バッファーを含む20μLの反応系において、混合物を60℃で30分間インキュベートした後、 85 ^℃で5分間不活性化した^。アガロースゲル電気泳動の結果、3バッチのAapCas12bヌクレアーゼはいずれもdsDNAを効果的に切断し、その切断効率は輸入ブランドT*と同等であることが示された。

図2 AapCas12bヌクレアーゼトランス切断活性試験結果

注： PAM配列を有するTarget dsDNA、sgRNA、Cas12b、Report ssDNA蛍光プローブ、および1 ×反応バッファーを含む20μLの反応系において、混合物を60℃で1時間インキュベートし、 30秒^ごとに蛍光シグナルを収集しました。その結果、Target DNA、sgRNA、およびCas12bが共存すると、Report ssDNA蛍光プローブが切断され、蛍光シグナルが放出されることが示されました。

文書:      

安全データシート

1 4 808 _MSDS_ Ver.EN202412 09 .pdf

マニュアル

1 4 808 _マニュアル_Ver.EN202412 09 .pdf