グロビンmRNA除去プローブ（ヒト） ヒトグロビンmRNAを除去するために設計されています。HBA1 /2、HBB、HBD、HBM、HBG1/2、HBE1、HBQ1、HBZなど、成人、乳児、胎児のグロビンmRNAを効果的に除去できます。本製品は、Hieff NGS TM MaxUp rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat) (Yeasen#12253) と併用することで、^トータルRNAからrRNAとグロビンmRNAを効果的に除去します。本キットは、無傷RNAサンプルと分解RNAサンプルの両方に適しています。rRNAとグロビンmRNAを除去したRNAサンプルは、mRNAと非コードRNAのハイスループットシーケンス解析に使用でき、シーケンス結果における有効データの割合を大幅に向上させ、cDNA合成やその他のダウンストリームアプリケーションにも使用できます。

製品のアプリケーション

100 ng ～ 1 μg の総 RNA サンプル (ヒト、マウス、ラットの血液リソース) と、完全な RNA サンプルまたは部分的に分解された RNA サンプルの両方に適しています。

製品コンポーネント

配送と保管

すべての部品はドライアイスとともに出荷され、-20°C で 1 年間保管できます。

形

ヒト血液全RNA 500 ngおよび100 ngをそれぞれrRNA除去およびrRNAとグロビンの同時除去に供した。ライブラリ構築およびシーケンシング後、グロビンmRNA含有量を比較した。

注意事項

1. RNase汚染のない消耗品を使用し、実験エリアを定期的に清掃してください。RNase汚染の除去には、ThermoFisher社のRNAZap ^™高効率核酸除去スプレーの使用をお勧めします。

2. RNAサンプルはゲノムDNAの混入がないようにしてください。サンプル中にgDNAが残っている場合は、使用前にDNase Iで消化し、精製する必要があります。

3. RNAサンプルの最大入力量は10μLです。サンプル量が多い場合は、事前に濃縮することも可能です。

4.安全と健康のため、操作時には白衣と使い捨て手袋を着用してください。

5.研究目的のみにご使用ください。

説明書

1. RNAへのプローブハイブリダイゼーション

1.1 PCRチューブに10 ng～1 μgのtotal RNAをヌクレアーゼフリー水で希釈し、最終容量10 μLとする。RNAは氷上で保存する。

1.2 氷上で以下のRNA/プローブハイブリダイゼーション反応を組み立てる 表1に従って。

 表1 RNA/プローブハイブリダイゼーション反応

1.3 ピペッティングで少なくとも10回上下に軽く動かし、よく混ぜます。チューブをマイクロ遠心分離機で軽く遠心分離し、チューブ側面に溜まった液体を回収します。

1.4チューブをサーモサイクラーにセットし、加熱蓋を 105°C に設定して表 2 のプログラムを実行します。

表2 RNA/プローブハイブリダイゼーションの反応プログラム

2. RNase H消化

2.1 表 3 に従って、氷上で次の RNase H 消化反応を組み立てます。

表3 RNase H消化反応

2.2ピペッティングで少なくとも10回上下に軽く動かし、よく混ぜます。チューブをマイクロ遠心分離機で軽く遠心分離し、チューブ側面に溜まった液体を回収します。

2.3チューブをサーモサイクラーにセットし、次のプログラムを実行します：蓋を50°C、37°C​​、30分、4°Cで保持。

3. DNase I消化

3.1 表4に従って、氷上で次のDNase I消化反応を組み立てます。

表4 DNase Ⅰ消化反応

3.2 ピペッティングで少なくとも10回上下に軽く動かし、よく混ぜます。チューブをマイクロ遠心分離機で軽く遠心分離し、チューブ側面に溜まった液体を集めます。

3.3チューブをサーモサイクラーにセットし、次のプログラムを実行します：蓋を外し、37°C​​、30 分、4°C で保持。

4. RNAの精製

4.1 Hieff NGS ^TM RNA Cleaner (Cat#12602) を室温に戻して、使用前にボルテックスでビーズを完全に再懸濁します。

4.2ステップ3.3のRNA溶液に110µL（2.2×）のビーズを加え、ピペッティングで少なくとも10回上下させてよく混ぜます。

4.3 室温で5分間インキュベートしてRNAをビーズに結合させます。

4.4 チューブを磁気スタンドに置き、ビーズと上清を分離します。溶液が透明になったら（約3分後）、上清を捨てます。ピペットチップがビーズに触れないように注意してください。

4.5 チューブを磁気スタンドに置いたままにします。チューブに新しく調製した80%エタノール200µLを加えます。室温で30秒間インキュベートした後、上清を捨てます。ピペットチップがビーズに触れないように注意してください。

4.6 手順 4.5 をもう 1 回繰り返して、合計 2 回洗浄します。

4.7 10µLのピペットチップで残留エタノールを除去します。チューブを磁気スタンドに置き、蓋を開けたまま最大5分間、ビーズを自然乾燥させます。

4.8 チューブを磁気スタンドから取り外します。11μLのヌクレアーゼフリー水を加えてビーズからRNAを溶出します。ピペッティングで少なくとも10回上下に振ってよく混合し、チューブを軽く遠心分離します。

4.9 室温で5分間インキュベートします。チューブを磁気スタンドに置き、溶液が透明になるまで（約3分）待ちます。

4.10 上清液10µLをヌクレアーゼフリーチューブに移します。

注: この時点で停止する必要がある場合は、サンプルを -80°C で保存できます。

文書:

安全データシート

12806_MSDS_HB250706_EN.PDF

マニュアル

12806_マニュアル_Ver.EN20250715.pdf