ハイフェア™ AdvanceFast 1st Strand cDNA合成キット（染料なし）は、Hifair™に基づいて開発された高速逆転写キットです。 III 1st Strand cDNA合成キット（染料不使用）は、PCR増幅およびRT-qPCR実験に適しています。Hifair™ III 1st Strand cDNA合成キット（染料不使用）と比較して、安定した検出率、特異性、そして収量保証を誇り、逆転写反応時間は6分未満まで短縮できるため、実験時間を大幅に短縮できます。

本キットにはgDNA Digester Mixが含まれており、RNAテンプレートに残留するゲノムDNAのコンタミネーションを除去し、より信頼性の高い結果を得ることができます。本キットには、ランダムプライマーN6とオリゴ(dT) _18の2種類のcDNA合成プライマーが付属しています。ユーザーは、逆転写プライマーとして、ランダムプライマーN6、オリゴ(dT) ₁₈ 、または遺伝子特異的プライマーを必要に応じて選択できます。合成された一本鎖cDNA産物は、その後のPCRまたはqPCR反応に直接使用できます。

仕様

コンポーネント

ストレージ

この製品は-25～-15℃で保管してください。 1年。

説明書

1. 実験で残留ゲノムDNAの除去が必要な場合

1）gDNAの消化

RNaseフリーの遠心チューブに以下の混合液を調製し、ピペッティングでよく混合する。42℃で2分間インキュベートする。

* Total RNAの投入量は2μgを超えないことを推奨します。標的遺伝子の発現レベルが低い場合は、最大5μgのTotal RNAまで投入量を増やすことができます。

2）逆転写反応系の調製（20μL系）

* プライマーの量は、テンプレートの投入量に応じて調整できます。逆転写産物をqPCR実験に使用する場合は、推奨量に応じてランダムプライマーをシステム内に添加できます。

** 最初に 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (No Dye) を加えてよく混ぜ、次に逆転写プライマーを加えてプライマーが gDNA Digester の影響を受けないようにすることをお勧めします。

3）逆転写手順の設定

* GC含有量の高いテンプレートや複雑なテンプレートの場合は、逆転写温度を60℃まで上げることができます。

** 本製品は14 kb未満のcDNA配列を合成できます。より長いcDNAが必要な場合は、逆転写時間を適切に延長してください。

2. 実験でゲノムDNAの除去が必要ない場合

1）逆転写反応系の調製（20μL系）

* Total RNAの投入量は2μgを超えないことを推奨します。標的遺伝子の発現レベルが低い場合は、最大5μgのTotal RNAまで投入量を増やすことができます。

** プライマーの量は、テンプレートの投入量に応じて調整できます。逆転写産物をqPCR実験に使用する場合は、推奨量に応じてランダムプライマーをシステムに追加できます。

2）逆転写手順の設定

* GC含有量の高いテンプレートや複雑なテンプレートの場合は、逆転写温度を60℃まで上げることができます。

** 本製品は14 kb未満のcDNA配列を合成できます。より長いcDNAが必要な場合は、逆転写時間を適切に延長してください。

注記

1. すべての操作は氷上で実行し、RNase 汚染を避ける方法で実行する必要があります。
2. この製品は研究用途にのみご使用いただけます。
3. 安全のため、白衣と使い捨て手袋を着用して作業してください。

文書: