図3. 超長鎖断片のライゲーション。10923ESではコロニー数が多く、陽性率は100%であることが示されています。A：組換え体形質転換プレート。ベクター（21 kb）と挿入断片（4.5 kb）のモル比は1：2です。B：挿入断片のPCR同定電気泳動。M：Yeasen 10505ES。ベクター量：20μL反応系に200 ng、反応条件：50℃、40分。
Hieff Clone™ Universal II One Step Cloning Kit は、新しくアップグレードされたクローニング キットです。 慎重に最適化された第2世代2×Hieff Clone™ Universal II Enzyme Premix は、組み換え酵素と組み換え反応に必要なバッファーを独自の組み換えエンハンサーとともに組み合わせ、組み換えクローニングの効率を大幅に向上させます。 このキットは、PCR産物を任意のベクターの任意のサイトにクローニングするように指示することができ、未精製PCR産物、直接回収されたPCR産物、低濃度のゴム回収産物と互換性があり、本製品は結合断片の30％〜70％の相同アームGC含有量を再構成することができます。ベクターは完全に直線化され、直線化ベクター末端の15〜25bpの相同配列が挿入断片の陽性および逆PCRプライマーの5'末端に導入されたため、挿入断片のPCR産物の5'末端と3'末端は、それぞれ直線化ベクターの両端に対応する正確な配列を持ちました。組み換え酵素の作用により、PCR産物と直線化ベクターの組み換え反応は、50℃でわずか5分で完了します。クローニングの陽性率は95％以上に達します。 特徴 シンプル: 1 回の反応で最大 6 個の DNA 断片をクローン化します。 柔軟性: 設計ガイドラインにより、任意のベクトルに組み立てることができます。 効率的: 1 ～ 7 個の断片の連結に効率的です。 アプリケーション 急速な クローニング: 複数の重複した DNA 断片を 1 ステップの 5 ～ 50 分の等温反応でシームレスに連結できます。 誘導クローニング; 部位特異的変異誘発。 仕様 結紮 最大7個のフラグメント 製品タイプ DNAアセンブリ コンポーネント コンポーネント番号 名前 10923ES05 （ 5T ） 10923ES20 （ 20T ） 10923ES50 （ 50トン） 10923 -A 2 ×ハイフクローンTM ユニバーサルII酵素プレミックス 50μL 200μL 500μL 10923 -B 500 bp コントロールインサート ( 2 5 ng/ μL ) 5μL 5μL 5μL 10923 -C pUC...
Hieff Clone™ Universal II One Step Cloning Kit は、新しくアップグレードされたクローニング キットです。
慎重に最適化された第2世代2×Hieff Clone™ Universal II Enzyme Premix は、組み換え酵素と組み換え反応に必要なバッファーを独自の組み換えエンハンサーとともに組み合わせ、組み換えクローニングの効率を大幅に向上させます。
このキットは、PCR産物を任意のベクターの任意のサイトにクローニングするように指示することができ、未精製PCR産物、直接回収されたPCR産物、低濃度のゴム回収産物と互換性があり、本製品は結合断片の30％〜70％の相同アームGC含有量を再構成することができます。ベクターは完全に直線化され、直線化ベクター末端の15〜25bpの相同配列が挿入断片の陽性および逆PCRプライマーの5'末端に導入されたため、挿入断片のPCR産物の5'末端と3'末端は、それぞれ直線化ベクターの両端に対応する正確な配列を持ちました。組み換え酵素の作用により、PCR産物と直線化ベクターの組み換え反応は、50℃でわずか5分で完了します。クローニングの陽性率は95％以上に達します。
特徴
シンプル: 1 回の反応で最大 6 個の DNA 断片をクローン化します。
柔軟性: 設計ガイドラインにより、任意のベクトルに組み立てることができます。
効率的: 1 ～ 7 個の断片の連結に効率的です。
アプリケーション
急速な クローニング: 複数の重複した DNA 断片を 1 ステップの 5 ～ 50 分の等温反応でシームレスに連結できます。
誘導クローニング; 部位特異的変異誘発。
仕様
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結紮 |
最大7個のフラグメント |
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製品タイプ |
DNAアセンブリ |
コンポーネント
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コンポーネント番号 |
名前 |
10923ES05 （ 5T ） |
10923ES20 （ 20T ） |
10923ES50 （ 50トン） |
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10923 -A |
2 ×ハイフクローンTM ユニバーサルII酵素プレミックス |
50μL |
200μL |
500μL |
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10923 -B |
500 bp コントロールインサート ( 2 5 ng/ μL ) |
5μL |
5μL |
5μL |
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10923 -C |
pUC 19コントロールベクター、直線化（50 ng/ μL ） |
5μL |
5μL |
5μL |
ストレージ
この製品は-25～-15℃で1年間保管してください。 年。
数字
形 1. 10 ngの低入力単一フラグメントを、6μLの小型システムの非蘇生受容状態で接続しました。 結果、10923ESは競合製品よりも優れた性能を示し、高い接続効率、より多くのコロニー形成、そして100%の陽性率を示した。AB：クローンプレート。キャリア（10 kb）と挿入断片（1 kb）のモル比は1：2であった。C：挿入断片PCRで同定された電気泳動マップ、M：YEASEN 10505ES。
図2. 6つの断片（全長7.6 kb）を11.6 kbプラスミドにクローニングした。10923ESは競合製品よりも優れた性能を示し、コロニー数が多く、陽性率は100%であった。AB：コロニープレート。キャリア断片（11.6 kb）と挿入断片のモル比は1：2であった。C：挿入断片の電気泳動分析。M：YEASEN 10505ES。プラスミドインプット量： 200 ng/20 μL、50℃、50分。
関連引用文献:
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[2] Xu Y、Yu Q、Wang P、et al. 選択的小分子c-Myc分解剤は致死的なc-Myc過剰発現腫瘍を強力に退縮させる。Adv Sci (Weinh). 2022;9(8):e2104344. (IF:16.806)
[3] Guan B, Jiang YT, Lin DL, Lin WH, Xue HW. ホスファチジン酸はGAPC（グリセルアルデヒド-3-リン酸脱水素酵素）およびPGK（ホスホグリセリン酸キナーゼ）タンパク質との結合による競合阻害を介してオートファジーを抑制する[2022年3月15日オンライン先行公開]. Autophagy . 2022;1-15. (IF:16.016)
[4] He X, Li Y, Chen Q, et al. O-GlcNAc化とSIRT7の安定化はSIRT7-REGγ相互作用を阻害することで膵臓癌の進行を促進する[印刷に先駆けてオンライン出版、2022年4月14日]. Cell Death Differ . 2022;10.1038/s41418-022-00984-3. (IF:15.828)
[5] Zhou T, Zhu X, Ye Z, et al. ループスエンハンサーリスクバリアントは、lncRNAとDNAメチル化機構の協調によりIRF8の調節異常を引き起こす。Nat Commun. 2022;13(1):1855. 2022年4月6日発行。 (IF:14.919)
[6] Li T, Chen X, Qian Y, et al. マウスの血糖恒常性維持を可能にするパルス状遺伝子発現のための合成BRETベース光遺伝学デバイス. Nat Commun. 2021;12(1):615. 2021年1月27日発行. (IF:14.919)
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[ 9 ] Jiang L, Wang Y, Xia A, et al. 亜硫酸還元酵素の天然の一塩基多型変異はトウモロコシの硫黄同化に影響を与える。New Phytol. 2021;232(2):692-704. (IF:10.152)
Storage
FAQ
The maximum size of the assembled fragments for 10922 can reach up to 23k, and for 10923 it can reach up to 25k. Additionally, 10923 can be used in small-scale experiments with a minimum volume of 6μL.
Using universal M13 primers as the template, a band of over 500 base pairs was amplified.
Both ampicillin and carbenicillin are fine. I recommend carbenicillin because ampicillin loses its effectiveness relatively quickly.
No. The upgraded version of 10923ES has improved the cloning success rate. Although there were instances of freezing, after multiple verification tests, it was confirmed that freezing and thawing do not affect the product performance. Please refer to the verification results below.
Citations
Documents
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|---|
| Hieff_Clone_Universal_II_One_Step_Cloning_Kit.pdf |
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