説明
LZCap™AG(3'Ma-Cy7)は、Cy7蛍光マーカーを有するCap1類似体であり、mRNA共転写キャッピング試薬として使用できます。T7ポリメラーゼの作用下で、LZCap®AG(3'Ma-Cy7)、NTP、および鋳型DNAが共転写され、5'末端にCap 1構造を持つmRNAが生成されます。キャップされたmRNAは、細胞内および生体内で直接翻訳・発現することができ、優れた発現効率が得られます。LZCap®AG(3'Ma-Cy7)でキャップされたmRNAは、フローサイトメトリーおよび蛍光顕微鏡によるCy7蛍光検出により、mRNAおよびLNPの分布を追跡・特定することができます。LZCap®AG(3'Ma-Cy7) mRNAのCy7蛍光の推奨波長は(651/780)です。
仕様
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カタログ番号 |
10689ES10/10689ES60 |
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サイズ |
50μL 、100μL |
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分子式 |
C 68 H 86 N 18 O 30 P 4 S 2 （遊離酸） |
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分子量 |
1823.55 （遊離酸） |
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集中 |
25 mM |
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純度 |
HPLC ≥90% |
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塩の種類 |
NH 4 + |
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構造 |
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コンポーネント
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名前 |
10689ES10 |
10689ES60 |
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LZCap™ AG(3'Ma-Cy7) |
50μL |
100μL |
ストレージ
この製品は-25～-15℃で2年間保管してください。
説明書
LZCap™のDNAテンプレート設計
LZCap™AG(3'Ma-Cy7)は、AGで始まる配列に適しています。T7プロモーター（下線部）に続くAG配列は、効果的に転写を開始することができます。
操作手順
1.実験に必要な部品を氷上で解凍します。
2. 以下の反応系に従って室温で転写システムを準備します。
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成分 |
体積( μL ) |
最終濃度 |
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RNaseフリー水 |
20μLまで増量する |
/ |
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ATP(100mM) |
1 |
5mM |
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UTP(100mM) |
1 |
5mM |
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CTP（100mM） |
1 |
5mM |
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GTP(100mM) |
1 |
5mM |
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LZCap ® AG(3'Ma-Cy7) (25mM) |
3.2 |
4mM |
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10×転写バッファー |
2 |
1× |
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線状DNA |
1μg |
50ng/μL |
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組換えRNase阻害剤（40U/μL） |
0.5 |
1U/μL |
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ピロホスファターゼ（0.1U/μL） |
0.4 |
0.002U/μL |
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T7 RNAポリマー（250U/μL） |
0.64 |
8U/μL |
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最終巻 |
20μL |
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【注】 ：*野生型UTPの代わりに修飾N-Me-pUTPを使用できます。修飾N-Me-pUTPはmRNAの免疫原性を低下させます。3. 調製した反応溶液を混合し、軽く遠心分離した後、37℃で2～3時間インキュベートします。転写産物の長さが100nt未満の場合は、反応時間を4～8時間に延長してください。
3. 調製した反応溶液を混合し、軽く遠心分離した後、37℃で2～3時間インキュベートする。転写産物の長さが100nt未満の場合は、反応時間を4～8時間に延長する。
注記:
1) LZCap™AG (3'Ma-Cy7) は、5'AG 3' 開始配列を持つ T7 プロモーター転写ベクターに適しています。これは、ベクターの構築時に考慮する必要があります。
2) LZCap™AG (3'Ma-Cy7) およびその mRNA 製品は光を避けて保管および使用してください。
3) 実験に使用する試薬、消耗品、容器には RNase 汚染がないこと。
4) 転写には直線化された DNA テンプレートを使用することをお勧めします。
5) 野生型ヌクレオチドの代わりに修飾ヌクレオチドを使用する場合、反応の最終濃度は変化しません。
6) PCR 産物を転写開始テンプレートとして使用すると、DNA テンプレートの量を半分に減らすことができます。
7) 10×転写バッファーの濃度が高いため、高塩濃度環境下ではポリメラーゼが不活性化されます。同時に、バッファーには鋳型DNAと沈殿物を形成する成分が含まれています。反応溶液を調製する際には、成分の添加順序を調整し、系を設計する必要があります。まず水を加え、次にバッファー、NTPを加え、最後に鋳型と酵素を加えることで、高濃度の10×塩イオンが酵素に影響を与えないようにします。
8) 転写後のmRNA精製では、mRNA沈殿物を予め冷却した75%エタノールで1回洗浄してください。繰り返し洗浄すると蛍光基に影響が出ます。
文書:
安全データシート
マニュアル
支払いとセキュリティ
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問い合わせ
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よくある質問
この製品は研究目的のみに使用され、人間や動物の治療や診断に使用することを意図したものではありません。製品とコンテンツは、
特定のアプリケーションでは、追加のサードパーティの知的財産権が必要になる場合があります。