等温核酸増幅技術は、増幅原理の違いにより様々な種類に分類できます。最も一般的で広く適用されているのは、2000年に納富氏をはじめとする日本の研究者によって開発されたLAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification）技術です。LAMP法の技術的特徴は、標的遺伝子上の6つの領域を標的とする4つのプライマーを設計し、鎖置換型Bst DNAポリメラーゼを用いて60～65℃の一定温度で増幅反応を行うことです。これにより、15～60分で10 9 ～ 10 10倍の増幅を達成できます。
Bst DNAポリメラーゼは、LAMP等温増幅技術の中核酵素です。高い熱安定性、鎖置換活性、そしてポリメラーゼ活性を有し、一定温度条件下でテンプレートを迅速かつ効率的かつ特異的に増幅します。増幅に熱変性サイクルを必要とするPCRとは異なり、LAMP法ではそのようなサイクルを必要とせず、実験全体を1時間以内に完了できます。
製品の利点
グリセロールを含まない酵素、凍結乾燥に適しています
常温輸送でコストを削減
強力な鎖置換活性、高感度かつ安定
迅速な水分補給、操作が簡単
パフォーマンスのハイライト
01 蛍光染料法の応用
1、高い感度と優れた特異性
RT-LAMP蛍光色素増幅システムにおいて、凍結乾燥粉末ケーキ14405ESの増幅性能は、液体Bst酵素（グリセロール含有およびグリセロールフリー）の増幅性能と一致しており、どちらも50コピー/Tの感度で100%検出可能です。特異性は良好で、48ウェルのNTC（ネガティブテンプレートコントロール）では検出されませんでした。
2、優れた熱加速安定性
RT-LAMP蛍光色素増幅システムにおいて、凍結乾燥粉末を45℃で7日間、45℃で15日間、室温で19日間保存した。熱加速後、製品の性能はグリセロールフリーBst酵素の液体バージョンと一貫性を保ち、NTC（ネガティブテンプレートコントロール）ではピークは観察されなかった。
3、加速後の再凍結をサポート
RT-LAMP蛍光色素増幅システムにおいて、凍結乾燥粉末を45℃で7日間、45℃で15日間保存しました。加熱加速処理後の凍結乾燥粉末は、その後、2回目の凍結乾燥（酵素単体およびRT-LAMP試薬を含む）を行いました。実験の結果、加速処理および2回目の凍結乾燥後も、製品の性能はグリセロールフリーBst酵素の液体バージョンと一貫しており、NTC（ネガティブテンプレートコントロール）にピークは見られませんでした。製品の安定性は良好で、2回目の凍結乾燥および2回目の凍結乾燥後の加速に適しています。
02 pH比色法の応用
1、高い感度と優れた特異性
RT-LAMP pH比色増幅システムでは、凍結乾燥粉末ケーキ14405ESの増幅感度は50コピー/T（検出率100％）に達し、特異性も良好で、NTC（ネガティブテンプレートコントロール）の24ウェルでは検出されませんでした。
2、優れた熱加速安定性
RT-LAMP pH比色増幅システムにおいて、凍結乾燥粉末14405ESの45℃、15日間の熱加速安定性、加速後の二次凍結乾燥後の安定性（45℃、7日間の加速後、再水和）、および再水和後の保存安定性（再水和後、-20℃、7日間保存）を調査しました。実験の結果、14405ES製品は良好な安定性を示し、熱加速後の製品性能に影響を与えず、加速後の二次凍結乾燥にも対応できることが示されました。
おすすめ商品
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製品タイプ |
製品機能 |
製品名 |
商品番号 |
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RT-LAMPミックス |
蛍光染料 |
13762ES |
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pH指示薬 |
RT-LAMP pH感受性染料キット |
13906ES |
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凍結乾燥可能なpH指示薬 |
RT-LAMP pH感受性色素発色性バージョン凍結乾燥可能キット |
13920ES |
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Bst酵素 |
グリセロール |
14402ES |
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グリセロールフリー |
14405ES |
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バッファ |
基本バッファー（染料等不使用） |
10×Hieff™ Bst Plus DNAポリメラーゼバッファー |
15441ES |