Descrizione
ArCas12a, derivato dal sistema CRISPR di Agathobacter rettale batteri e noto anche come Cpf1, è una proteina monomerica composta da 1263 amminoacidi. Come membro di classe II (tipo V) del sistema CRISPR/Cas, ArCas12a funziona esclusivamente attraverso una singola proteina effettrice e mostra differenze significative da Cas9, come il targeting di motivi ricchi di T, il non richiedere crRNA transattivante, la produzione di estremità appiccicose in caso di rotture del doppio filamento del DNA, la partecipazione all'elaborazione dell'RNA e il possesso di attività di nucleasi del DNA.
ArCas12a non ha il dominio HNH e può utilizzare in modo indipendente il suo dominio RuvC per riconoscere la regione PAM ricca di timina (T) all'estremità 5' dell'acido nucleico bersaglio sotto la guida di CRISPR RNA (crRNA), avviando la scissione del DNA bersaglio. È stato utilizzato con successo per l'editing del genoma in molti mammiferi e piante. Inoltre, ArCas12a mostra attività di scissione trans, in grado di tagliare indiscriminatamente il DNA a singolo filamento non bersaglio (ssDNA) nel sistema di reazione.
Rispetto ad altri LbCas12a/AsCas12a, ArCas12a dimostra una maggiore adattabilità alla temperatura (25-55loC), rendendolo adatto per applicazioni di editing del genoma e di rilevamento degli acidi nucleici.
Caratteristiche
Ampio intervallo di temperatura di reazione: Esibisce attività di scissione nell'intervallo di temperatura di 25-55loC
Basso residuo di nucleasi: Nessuna esonucleasi residua, nickasi o RNasi
Attività di scissione cis: Scissione altamente efficace del DNA a doppio filamento in vitro
Attività di trans-scissione: Elevata attività di trans-scissione, adatta per il rilevamento degli acidi nucleici
Applicazioni
Modifica genetica CRISPR/Cas
Diagnostica e rilevamento basati sul sistema CRISPR/Cas
Altre applicazioni di rilevamento combinate con tecnologie di amplificazione isotermica degli acidi nucleici (RPA e LAMP), ecc.
Specifiche
| Fonte | Il gene Cpf1 da Agathobacter rettale si esprime attraverso l'espressione ricombinante in Escherichia coli |
| Peso molecolare | 149KDa |
| Sequenza PAM | TTTN o TTTV |
| Condizioni di reazione | 50 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, pH 7.9 @25loC |
| Concentrazione | 10 micron |
| Purezza | >95% (SDS-PAGINA) |
| Condizioni di inattivazione | 85loC, 5-10 minuti |
Componenti
| Componenti NO. | Nome | 14702ES65 | 14702ES80 |
| 14702-A | Nucleasi ArCas12a (10 micronM) | 100 microlitri | |
| 14702-B | 10×Tampone di reazione ArCas12a | 1 ml | 1 ml |
Spedizione e stoccaggio
Questo prodotto deve essere conservato a -25 ~ -15loC per 2 anni.
Cifre
Figura 1. Test dell'attività di scissione cis di ArCas12a: M: marcatore; C: DNA a doppio filamento stampo (dsDNA)
Nota: Sotto la guida del crRNA, può scindere efficacemente il dsDNA (600 bp) per produrre due frammenti (200 bp + 400 bp).
Figura 2. Risultati del test di attività di trans-scissione ArCas12a
Nota: Utilizzando dsDNA come target, ArCas12a, crRNA e una sonda reporter ssDNA (contenente un gruppo reporter fluorescente) sono stati aggiunti per la scissione in vitro. Una volta che ArCas12a forma un complesso con crRNA e il DNA target, attiva l'attività di trans-scissione, tagliando la sonda reporter ssDNA, emettendo così fluorescenza.
Documenti:
Scheda di sicurezza
14702_Scheda di sicurezza_Versione EN20241205.pdf
Manuali
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