- पृष्ठभूमि
इस रिपोर्ट में संक्षेपित डेटा MycAway के लिए येसेन बायोटेक्नोलॉजी (शंघाई) कंपनी लिमिटेड द्वारा किया गया हैटीएम माइकोप्लाज्मा रियल-टाइम qPCR डिटेक्शन किट (2G) उत्पाद।
सारांश डेटा केवल उपयोगकर्ता के संदर्भ के लिए है, और उपयोगकर्ता को अपने स्वयं के नमूनों का उपयोग करके माइकोप्लाज्मा विधि को सत्यापित करने की आवश्यकता है ताकि यह पुष्टि हो सके कि विधि उपयोगकर्ता की आवश्यकताओं को पूरा कर सकती है। इस किट का उपयोग करने वाली सभी प्रयोगशालाओं को निम्नलिखित मापदंडों को सत्यापित करने की सिफारिश की जाती है: पता लगाने की सीमा, विशिष्टता और मजबूती।
येसेन बायोटेक्नोलॉजी (शंघाई) कंपनी लिमिटेड इस किट के लिए विस्तृत योग्यता रिपोर्ट प्रदान कर सकती है। यदि उपयोगकर्ता इस रिपोर्ट का उपयोग करता है, तो केवल उपयुक्तता (जिसमें पता लगाने की सीमा और विशिष्टता शामिल है) को सत्यापित किया जाना चाहिए।
सत्यापन सामग्री：
| प्रदर्शन | सत्यापन पैरामीटर | सत्यापन परिणाम |
| पता करने की सीमा | माइकोप्लाज़्मा स्ट्रेन का पता लगाने की सीमा | 10 प्रकार के फार्माकोपियल माइकोप्लाज्मा के लिए पता लगाने की सीमा: 10 सीएफयू/एमएल, प्रत्येक का 24 बार परीक्षण किया गया, जिसमें पता लगाने की दर ≥95% थी। |
| विशेषता | नमूना मैट्रिक्स हस्तक्षेप | 9 विभिन्न नमूना मैट्रिक्स और डीएनए कमजोरीकरण समाधानों का परीक्षण किया गया, कोई माइकोप्लाज्मा नहीं पाया गया। |
| क्रॉस प्रतिक्रियात्मकता | बायोफार्मास्युटिकल्स में आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले 14 स्ट्रेन और 6 इंजीनियरिंग कोशिकाओं का परीक्षण किया गया, कोई माइकोप्लाज्मा नहीं पाया गया। | |
| सहनशीलता | हिमीकरण-विगलन स्थिरता | किट के प्रदर्शन को प्रभावित किए बिना 20 बार दोहराए गए फ्रीज-थॉ चक्रों का सामना कर सकता है। |
| थर्मल त्वरण स्थिरता | 14 दिनों तक 37°C और 30 दिनों तक 4°C की परिस्थितियों में कोई प्रभाव नहीं। | |
| उपकरण संगतता | ABI7500, ABI QuantStudio™5, Bio-Rad CFX96, और Roche LightCycler®480 के साथ संगत। | |
| कवरेज | माइकोप्लाज्मा डीएनए प्रकारों का कवरेज | माइकोप्लाज्मा 16S rRNA अनुक्रमों का उपयोग करते हुए डेटाबेस तुलना में मॉलिक्यूट्स वर्ग की 183 प्रजातियां शामिल हैं। |
- प्रायोगिक सामग्री और विधियाँ
2.1 मायकअवेटीएम माइकोप्लाज्मा रियल-टाइम qPCR डिटेक्शन किट (2G), विक्रेता: येसेन, कैट नं.: 40619ES60.
2.2 मोलप्योरटीएम चुंबकीय अवशिष्ट डीएनए नमूना तैयारी किट, विक्रेता: येसेन, कैट नं.: 18461ES60.
2.3 माइकोप्लाज्मा संवेदनशीलता मानक मिनर्वा बायोलैब्स (एमबी) से खरीदे जाते हैं, जिनके स्ट्रेन नेशनल कलेक्शन ऑफ़ टाइप कल्चर (एनसीटीसी) से हैं। संवेदनशीलता मानक निष्क्रिय माइकोप्लाज्मा हैं और माइकोप्लाज्मा का पता लगाने के लिए न्यूक्लिक एसिड एम्पलीफिकेशन विधि (क्यूपीसीआर/पीसीआर विधि) के पद्धतिगत सत्यापन के लिए उपयोग किए जाते हैं। कुल 10 प्रकार के माइकोप्लाज्मा खरीदे जाते हैं जिनमें ईपी 2.6.7 और जेपी जी3 की आवश्यकताएं शामिल हैं। मानकों की जानकारी इस प्रकार है:
| विक्रेता | बिल्ली नं. | एनसीटीसी नं. | एटीसीसी नहीं। | सामग्री का नाम |
| मिनर्वा बायोलैब्स (एमबी) | 102-1003 | 10129 | 23838 | 10सीएफयू™ संवेदनशीलता मानक माइकोप्लाज्मा आर्जिनिनी |
| 102-2003 | 10112 | 23714 | 10सीएफयू™ संवेदनशीलता मानक माइकोप्लाज्मा ओरल | |
| 102-3003 | 10115 | 19610 | 10सीएफयू™ संवेदनशीलता मानक माइकोप्लाज्मा गैलिसिप्टिकम | |
| 102-4003 | 10119 | 15531 | 10सीएफयू™ संवेदनशीलता मानक माइकोप्लाज्मा न्यूमोनिया | |
| 102-5003 | 10124 | 25204 | 10सीएफयू™ संवेदनशीलता मानक माइकोप्लाज्मा सिनोविया | |
| 102-6003 | 10117 | 19989 | 10सीएफयू™ संवेदनशीलता मानक माइकोप्लाज्मा फर्मेन्टन्स | |
| 102-7003 | 10130 | 17981 | 10सीएफयू™ संवेदनशीलता मानक माइकोप्लाज्मा हायोरहिनीस | |
| 102-8003 | 10116 | 23206 | 10सीएफयू™ संवेदनशीलता मानक एकोलेप्लाज्मा लेडलावी | |
| 102-9003 | 10164 | 27556 | 10सीएफयू™ संवेदनशीलता मानक स्पाइरोप्लाज्मा सिट्री | |
| 102-11003 | 10113 | 23064 | 10सीएफयू™ संवेदनशीलता मानक माइकोप्लाज्मा सालिवेरियम |
2.4 मूल डेटा: इलेक्ट्रॉनिक संस्करण 'प्रायोगिक रिपोर्ट' में दर्ज किया गया मूल फ़ाइल 'MycAway' की उपफ़ाइलटीएम माइकोप्लाज्मा रियल-टाइम qPCR डिटेक्शन किट (2G)'।
2.5 विधियाँ: प्रयोग के लिए प्रयुक्त सामग्री और संचालन विधियाँ मूलतः येसेन बायोटेक्नोलॉजी (शंघाई) कंपनी लिमिटेड द्वारा निर्मित या निर्धारित की गई थीं, जिनका मूल्यांकन और सत्यापन लंबे समय तक किया गया, किट विकास और निर्माण में आईएसओ 13485 प्रणाली का पालन किया गया।
- योग्यता सामग्री और परिणाम
3.1 पता लगाने की सीमा (एलओडी)
10 CFU/mL माइकोप्लाज्मा मानक स्ट्रेन के न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण के साथ-साथ जांच भी मानक स्ट्रेन के लिए दिए गए निर्देशों के अनुसार तथा निष्कर्षण और जांच किट के लिए दिए गए निर्देशों के अनुसार की गई। 10 CFU/mL माइकोप्लाज्मा मानक स्ट्रेन के लिए कुल 24 परख प्राप्त किए गए। प्रत्येक प्रयोग में NCS (नेगेटिव कंट्रोल सैंपल) और NTC (नो टेम्प्लेट कंट्रोल) नमूनों का एक साथ परीक्षण किया गया।
परिणामों से पता चला कि एनसीएस और एनटीसी परिणाम संतोषजनक थे, और सभी 24 10 सीएफयू/एमएल नमूने सकारात्मक पाए गए, जिससे 24 परीक्षणों में से कम से कम 23 सकारात्मक परिणाम होने की आवश्यकता पूरी हो गई।
| नहीं। | सामग्री का नाम | जीवाणु द्रव की सांद्रता |
| 1 | माइकोप्लाज्मा आर्जिनिनी | 10 सीएफयू/एमएल |
| 2 | माइकोप्लाज्मा ओरल | 10 सीएफयू/एमएल |
| 3 | माइकोप्लाज्मा गैलिसिप्टिकम | 10 सीएफयू/एमएल |
| 4 | माइकोप्लाज्मा न्यूमोनिया | 10 सीएफयू/एमएल |
| 5 | माइकोप्लाज्मा सिनोविया | 10 सीएफयू/एमएल |
| 6 | माइकोप्लाज्मा फर्मेन्टन्स | 10 सीएफयू/एमएल |
| 7 | माइकोप्लाज्मा हायोरहिनीस | 10 सीएफयू/एमएल |
| 8 | एकोलेप्लाज्मा लेडलावई | 10 सीएफयू/एमएल |
| 9 | स्पाइरोप्लाज्मा सिट्री | 10 सीएफयू/एमएल |
| 10 | माइकोप्लाज्मा सालिवेरियम | 10 सीएफयू/एमएल |
तालिका 1 मान्य उपभेदों पर जानकारी
| 10 सीएफयू/एमएल | प्रयोग 1 | प्रयोग 2 | प्रयोग 3 |
| पता लगाने की दर | 8/8 | 8/8 | 8/8 |
| कुल | 24/24 | ||
तालिका 2 पता लगाने की सीमा के परिणाम
3.2 विशिष्टता
3.2.1 माइकोप्लाज्मा परीक्षण रेंज
किट में प्राइमर जांच अनुक्रमों की तुलना डेटाबेस में 16S rRNA जीनोम के साथ की गई। जैव सूचना विज्ञान विश्लेषण के माध्यम से, यह प्राप्त हुआ कि MycAwayटीएम नेक्स्टसेंस बायोलॉजिकल्स का माइकोप्लाज्मा क्यूपीसीआर डिटेक्शन किट (जांच विधि) जूक्सैन्थेला की कम से कम 183 प्रजातियों को कवर कर सकता है, जिसमें 120 माइकोप्लाज्मा, 9 यूरियाप्लाज्मा, 33 स्पाइरोप्लाज्मा और 7 कोलेस्ट्रॉन्गिला आदि शामिल हैं।
3.2.2 नमूना मैट्रिक्स हस्तक्षेप
9 सबस्ट्रेट्स (डुलबेको एमईएम, हैम एफ-10 मीडियम, एम-199 मीडियम, हैम एफ-12के कैघ्न, आरपीएमआई-1640 मीडियम, मैकॉय 5ए, हैम एफ-12के कैघ्न+1.0एमएम/एल ग्लूटामाइन, एल-15 लेबोविट्ज़ मेडटा +2.05 mM एल-ग्लूटामाइन, डीएमईएम-कम ग्लूकोज मानक माध्यम) को नमूना मैट्रिक्स हस्तक्षेप को सत्यापित करने के लिए नमूने के रूप में उपयोग किया जाता है, परिणामों से पता चला है कि माध्यम का किट अभिकर्मकों में कोई हस्तक्षेप नहीं है।
3.2.3 फ्लेक्सीबैक्टीरिया का पता लगाने की सीमा
निष्क्रिय माइकोप्लाज्मा (माइकोप्लाज्मा आर्जिनिनी, माइकोप्लाज्मा ओरेल, माइकोप्लाज्मा गैलिसेप्टिकम, माइकोप्लाज्मा न्यूमोनिया, माइकोप्लाज्मा सिनोविया, माइकोप्लाज्मा फर्मेन्टन्स, माइकोप्लाज्मा ह्योरिहिनिस, एकोलेप्लाज्मा लैडलावी, स्पाइरोप्लाज्मा सिट्री, माइकोप्लाज्मा सालिवेरियम) का 10 सीएफयू/एमएल पर निष्कर्षण और पता लगाना एनसीएस और एनटीसी नमूना परीक्षण के साथ आवश्यक है।
परिणामों से पता चला कि एनसीएस और एनटीसी का पता नहीं चला और परिणाम नकारात्मक थे; सभी 10 माइकोप्लाज्मा प्रजातियों का पता चला और परिणाम सकारात्मक थे।
3.2.4 क्रॉस प्रतिक्रिया
14 गैर-फ्लेक्सीबैक्टीरियल उपभेदों के लिए जिनमें क्लॉस्ट्रिडियम (क्लॉस्ट्रिडियम परफ़्रिंजेंस, क्लॉस्ट्रिडियम एसिटोब्यूटिलिकम), लैक्टोबैसिलस (लैक्टोबैसिलस एसिडोफिलस), स्ट्रेप्टोकोकस (स्ट्रेप्टोकोकस म्यूटेंस, स्ट्रेप्टोकोकस न्यूमोनिया), कई अन्य सामान्य बैसिलस-कोकस-फंगी सूक्ष्मजीव (स्टैफिलोकोकस एपिडर्मिडिस, एसिनेटोबैक्टर बाउमानी, एंटरोबैक्टर एरोजेनेस, माइक्रोकॉकस गार्सिनिया, स्यूडोमोनास एरुगिनोसा, स्यूडोमोनलबैक्टीरियम ल्यूकोसेफाला, साल्मोनेला एन्टेरिका एन्टेरिटिडिस उपप्रजाति एन्टेरिका, बैसिलस सबटिलिस, बैसिलस सबटिलिस और बैसिलस प्रजाति बैसिलस सेरेस, बैसिलस सेरेस) शामिल हैं, मोलप्योर का उपयोग करके माइकोप्लाज्मा का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया गया थाटीएम अवशिष्ट डीएनए नमूना प्रीप्रोसेसिंग किट (बोतलें) और MycAway के लिए चुंबकीय मनका विधिटीएम माइकोप्लाज्मा qPCR डिटेक्शन किट (जांच विधि) (2G) का उपयोग किया गया, तथा प्रत्येक प्रयोग PCS, NCS, तथा NTC नमूना परीक्षण के साथ-साथ किया गया।
परिणामों से पता चला कि पीसीएस, एनसीएस और एनटीसी परिणाम संतोषजनक थे; परीक्षण नमूने नकारात्मक थे और कोई क्रॉस-रिएक्टिविटी नहीं हुई।
3.3 मजबूती
3.3.1 हिमीकरण-विगलन स्थिरता
माइकोप्लाज्मा परीक्षण किट को -25 डिग्री सेल्सियस ~ -15 डिग्री सेल्सियस की स्थितियों के तहत फ्रीज-विगलन प्रयोगों के अधीन किया गया था, और परिणामों से पता चला कि किट 20 बार बार-बार फ्रीजिंग और विगलन का सामना करने में सक्षम था, और इसका प्रदर्शन प्रभावित नहीं हुआ था।
3.3.2 त्वरित स्थिरता
माइकोप्लाज्मा जांच किट को क्रमशः 14 दिनों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस और 30 दिनों के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर गर्म किया गया, और परिणामों से पता चला कि उत्पाद के प्रदर्शन पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा।
3.3.3 उपकरण प्रयोज्यता
माइकोप्लाज्मा डिटेक्शन किट के लिए, किट में पॉजिटिव कंट्रोल और माइकोप्लाज्मा न्यूमोनिया डीएनए की विभिन्न सांद्रताओं को परीक्षण के लिए नमूनों के रूप में इस्तेमाल किया गया था, और प्रयोग चार अलग-अलग ब्रांडों और मॉडलों पर किए गए थे, अर्थात् क्रमशः थर्मो साइंटिफिक एबीआई7500, थर्मो साइंटिफिक एबीआई क्यू5, शंघाई होंगशी एसएलएएन-96एस, और रोश लाइटसाइक्लर®480।ये प्रयोग चार विभिन्न ब्रांडों और मॉडलों, शंघाई होंगशी SLAN-96S और रोश लाइटसाइक्लर®480 के qPCR उपकरणों पर किए गए।
परिणामों से पता चला कि परीक्षण किए जाने वाले नमूनों का पता विभिन्न निर्माताओं के मॉडल के qPCR उपकरणों पर लगाया गया था और नकारात्मक नियंत्रण परिणाम योग्य थे, और किट का प्रदर्शन प्रभावित नहीं हुआ था।
- 4.संदर्भ
4.1 माइकोप्लाज्मा जांच विधि <3301>। चीनी फार्माकोपिया, भाग III [एस]। बीजिंग: चाइना साइंस एंड टेक्नोलॉजी प्रेस, 2020: 542-543।
4.2 विश्लेषणात्मक विधियों के सत्यापन के लिए दिशानिर्देश <9101>। चीनी फार्माकोपिया, भाग III [एस]। बीजिंग: चाइना साइंस एंड टेक्नोलॉजी प्रेस, 2020: 682।
4.3 फार्मास्यूटिकल्स के माइक्रोबायोलॉजिकल परीक्षण के लिए वैकल्पिक तरीकों के सत्यापन के लिए दिशानिर्देश <9201>। चीनी फार्माकोपिया, भाग III [एस]। बीजिंग: चाइना साइंस एंड टेक्नोलॉजी प्रेस, 2020: 684।
4.4 माइकोप्लाज़्मा। यूरोपीय फार्माकोपिया [एस]। 10वां संस्करण, 2020: खंड 2.6.7, 194-199।
4.5 बायोटेक्नोलॉजिकल/बायोलॉजिकल उत्पादों के उत्पादन के लिए उपयोग किए जाने वाले सेल सब्सट्रेट के लिए माइकोप्लाज्मा परीक्षण <G3-14-170>। जापानी फार्माकोपिया[एस]। 18वां संस्करण, 2021: 2678-2682।
4.6 एरिका जे. फ्रैट्ज़-बेरिला, फिलिप एंगार्ट, रयान जे. ग्राहम, एट अल. जानबूझकर माइकोप्लाज़्मा संदूषण घटनाओं के दौरान CHO सेल बायोरिएक्टर संस्कृतियों में उत्पादित मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के उत्पाद गुणवत्ता विशेषताओं पर प्रभाव। बायोटेक्नोलॉजी और बायोइंजीनियरिंग। 2020;117(9): 2802-2815।
4.7 दिमित्री वी. वोलोखोव, लॉरी जे ग्राहम, कर्ट ए ब्रोरसन, व्लादिमीर ई चिज़िकोव। सेल सब्सट्रेट और बायोलॉजिक्स का माइकोप्लाज्मा परीक्षण: वैकल्पिक गैर-सूक्ष्मजीववैज्ञानिक तकनीकों की समीक्षा। मोल सेल प्रोब्स। 2011 अप्रैल-जून;25(2-3):69-77।
4.8 ए.एल. इंगेब्रिटसन, सी.पी. गिब्स, सी. टोंग, जी.बी. श्रीनिवास। पशु चिकित्सा टीकों और जैविक उत्पादों के माइकोप्लाज्मा संदूषण के परीक्षण के लिए एक पीसीआर पहचान विधि। एप्लाइड माइक्रोबायोलॉजी में लेट। 2015 फरवरी;60(2):174-180।
आदेश की जानकारी
| विवरण | भाग संख्या |
| 18461ईएस | |
| MycAway™ माइकोप्लाज्मा qPCR डिटेक्शन किट (2जी) | 40619ईएस |