HEK293 मेजबान कोशिका डीएनए अवशेष जांच किट (3)जी)
योग्यता सारांश (श्रेणी संख्या: 4)1331ईएस60)
- पृष्ठभूमि
इस रिपोर्ट में संक्षेपित डेटा 'HEK293' के लिए येसेन बायोटेक्नोलॉजी द्वारा किया गया है मेजबान कोशिका डीएनए अवशेष जांच किट (3G)' उत्पाद। सारांश डेटा केवल उपयोगकर्ता के संदर्भ के लिए है, और उपयोगकर्ता को होस्ट सेल अवशेष को सत्यापित करने की आवश्यकता है डीएनए विधि अपने स्वयं के नमूनों का उपयोग करके पुष्टि करती है कि विधि उपयोगकर्ता की आवश्यकताओं को पूरा कर सकती है। इस किट का उपयोग करने वाली सभी प्रयोगशालाओं को निम्नलिखित मापदंडों को सत्यापित करने की सलाह दी जाती है: रैखिकता, सीमा, सटीकता, परिशुद्धता, परिमाणीकरण सीमा, विशिष्टता और मजबूती।
येसेन बायोटेक्नोलॉजी इस किट के लिए विस्तृत योग्यता रिपोर्ट प्रदान कर सकती है। यदि उपयोगकर्ता इस रिपोर्ट का उपयोग करता है, तो केवल उपयुक्तता (जिसमें परिशुद्धता, शुद्धता और विशिष्टता) को सत्यापित किया जाना चाहिए।
- प्रायोगिक सामग्री और विधियाँ
2.1 HEK293 मेजबान कोशिका डीएनए अवशेष जांच किट (3G), विक्रेता: येसेन, कैट नं.: 41331ES60.
2.2 MolPure® चुंबकीय अवशिष्ट डीएनए नमूना तैयारी किट, विक्रेता: येसेन, कैट नं.: 18461ES60.
2.3 मूल डेटा: इलेक्ट्रॉनिक संस्करण 'प्रायोगिक रिपोर्ट' में दर्ज किया गया मूल फ़ाइल 'HEK293' की उपफ़ाइल मेजबान कोशिका डीएनए अवशेष जांच किट (3जी)'.
2.4 विधियाँ: प्रयोग के लिए प्रयुक्त सामग्री और संचालन विधियाँ मूलतः येसेन बायोटेक्नोलॉजी द्वारा निर्मित या निर्धारित की गई थीं, जिनका मूल्यांकन और सत्यापन लम्बे समय तक किया गया, किट विकास और विनिर्माण में आईएसओ 13485 प्रणाली का पालन किया गया।
- योग्यता सामग्री और परिणाम
3.1 पता लगाने की सीमा
किट की रैखिक सीमा R के साथ 30 fg/μL~300 pg/μL थी2≥0.998, और प्रवर्धन दक्षता प्रत्येक सांद्रता परख के लिए CV<15% के साथ 90% ~ 110% रेंज थी।
चित्र 1 HEK293 डीएनए (3G) qPCR मानक वक्र
3.2 सटीकता
3.2.1 आरईकोवरी
3.2.1.1 रिक्त नमूना स्पाइकिंग रिकवरी प्रयोग
HEK293 के नमूने उच्च और निम्न सांद्रता पर डीएनए मानक: 300 पीजी/μएल, 3 पीजी/μएल, और 30 एफजी/μएल क्रमशः तैयार किए गए, और अवशिष्ट डीएनए नमूना पूर्व उपचार किट के लिए चुंबकीय मनका विधि का उपयोग करके निष्कर्षण के बाद परख की गई (प्रत्येक नमूने के लिए 2 निष्कर्षण प्रतिकृतियां की गईं, और प्रत्येक निष्कर्षण के लिए 3 परख प्रतिकृतियां की गईं), और नमूना पुनर्प्राप्ति और सीवी का विश्लेषण किया गया।
डीएनए नमूनों की विभिन्न सांद्रताओं के लिए, पुनर्प्राप्ति 70% से 130% तक थी, और सभी सी.वी. <20% थे।
| नमूना प्रकार | सैद्धांतिक एकाग्रता | 1 मतलब निकालें | 2 मतलब निकालें | औसत सांद्रता | सीवी | वसूली |
| रिक्त नमूना | / | / | / | / | / | / |
| रिकवरी नमूना 1 | 300 पीजी/μएल | 306.81 पीजी/μL | 279.57 पीजी/μL | 293.82 पीजी/μL | 6.56% | 97.94% |
| रिकवरी नमूना 2 | 3 पीजी/μएल | 3.11 पीजी/μL | 2.99 पीजी/μL | 3.09 पीजी/μL | 2.75% | 103.00% |
| रिकवरी नमूना 3 | 30 एफजी/μएल | 31.02 एफजी/μएल | 30.63 एफजी/μएल | 30.83 एफजी/μएल | 0.89% | 102.77% |
तालिका1 रिक्त नमूना स्पाइकिंग रिकवरी
3.2.1.2 सिम्युलेटेड सैंपल स्पाइकिंग रिकवरी प्रयोग
समान सांद्रता के नमूने (HEK293 DNA के 3 pg/μL) निकाले गए (प्रत्येक नमूने के लिए 2 निष्कर्षण प्रतिकृतियां की गईं और प्रत्येक निष्कर्षण के लिए 3 परख प्रतिकृतियां की गईं) 5 विभिन्न पृष्ठभूमि विलयनों (उच्च प्रोटीन, उच्च न्यूक्लिक अम्ल, उच्च और निम्न pH, उच्च लवण) के साथ और नमूना पुनःप्राप्ति और CVs का विश्लेषण किया गया।
विभिन्न पृष्ठभूमि समाधानों के लिए डीएनए नमूना पुनर्प्राप्ति 70% से 130% तक थी, सभी CVs <20% थे।
| नमूना प्रकार | सैद्धांतिक एकाग्रता | 1 मतलब निकालें | 2 मतलब निकालें | औसत सांद्रता | सीवी | वसूली |
| मूल नमूना | / | / | / | / | / | / |
| उच्च प्रोटीन | 3 पीजी/μएल | 2.65 | 2.80 | 2.73 | 3.80% | 90.87% |
| उच्च परमाणु अम्ल | 2.82 | 2.97 | 2.90 | 3.71% | 96.58% | |
| उच्च नमक | 2.88 | 2.70 | 2.79 | 4.47% | 92.89% | |
| उच्च पीएच | 2.81 | 2.93 | 2.87 | 2.98% | 95.71% | |
| कम पीएच | 2.76 | 2.79 | 2.77 | 0.99% | 92.48% |
तालिका2 बुनियादी नमूना स्पाइकिंग रिकवरी
3.3 परिशुद्धता
3.3.1 repeatability
HEK293 DNA मानकों के लिए 30 fg/μL की सांद्रता पर CV <15% के साथ परख को 10 बार दोहराएं।
| repetitions | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | अर्थ | सीवी% |
| पता लगाने का मान (fg/μL) | 29.51 | 30.02 | 30.13 | 30.16 | 27.99 | 31.01 | 31.05 | 30.95 | 31.02 | 29.86 | 30.17 | 3.15% |
तालिका3 पुनरावृत्ति परिणाम
3.3.2 मध्यवर्ती परिशुद्धता
तीन प्रयोगकर्ताओं ने स्वतंत्र रूप से HEK293 DNA मानक नमूनों का उच्च और निम्न सांद्रता पर परीक्षण किया: 300 pg/μL, 3 pg/μL, और 30 fg/μL, और प्रत्येक सांद्रता के लिए तीन प्रतिकृतियां की गईं, और प्राप्त सभी नौ आंकड़ों का CV <15% था।
| ऍक्स्प |
वास्तविक सांद्रता सैद्धांतिक एकाग्रता | HEK293 डीएनए (3G) | ||
| 300 पीजी/यूएल | 3 पीजी/यूएल | 30 एफजी/यूएल | ||
| एक्सप 1 | निर्धारण 1 | 319.58 | 3.026 | 32.02 |
| निश्चय 2 | 309.76 | 3.051 | 37.01 | |
| निश्चय 3 | 309.24 | 3.067 | 36.03 | |
| एक्सप 2 | निश्चय 4 | 308.34 | 2.909 | 29.91 |
| निश्चय 5 | 308.54 | 2.9 | 29.67 | |
| निश्चय 6 | 305.83 | 2.921 | 28.85 | |
| एक्सप 3 | निश्चय 7 | 299.11 | 3.035 | 29.36 |
| निश्चय 8 | 300.07 | 2.833 | 31.14 | |
| निश्चय 9 | 302.03 | 3.033 | 33.07 | |
| / | अर्थ | 306.95 | 2.975 | 31.90 |
| / | सीवी% | 2.03% | 2.83% | 9.26% |
तालिका4 मध्यवर्ती परिशुद्धता परिणाम
3.4 विशिष्टता
बायोलॉजिक्स के उत्पादन में सामान्यतः प्रयुक्त होने वाले कोशिकीय जीनोमिक डीएनए के हस्तक्षेप का मूल्यांकन HEK293 डीएनए पहचान अभिकर्मकों के साथ हस्तक्षेप के लिए किया गया, तथा हस्तक्षेप समूह नियंत्रण समूह के साथ ओवरलैप हो गया तथा कोई हस्तक्षेप नहीं देखा गया (नीचे दिया गया चित्र, HEK293 डीएनए पहचान अभिकर्मकों के साथ CHO, E.coli, तथा पिचिया पास्टोरिस जीनोमिक डीएनए के हस्तक्षेप डेटा को क्रम से दर्शाता है)।
चित्र 2 हस्तक्षेप प्रयोग के परिणाम
3.5 परिमाणीकरण सीमा
HEK293 DNA का पता 30 fg/μL, 20 fg/μL, 10 fg/μL और 5 fg/μL पर लगाया गया, जिसमें प्रत्येक सांद्रता के लिए 10 प्रतिकृतियाँ थीं। परिणामों से पता चला कि 10 fg/μL और उससे अधिक की सांद्रता पर CV <20% था। यानी, HEK293 होस्ट सेल DNA अवशेष पहचान किट (3G) की मात्रा निर्धारण की सीमा 10 fg/μL थी।
|
repetitions परीक्षण आइटम | HEK293 डीएनए (3G) (fg/μL) | |
| मात्रा | पुनर्गणना अनुपात% | |
| 1 | 11.04 | 110.40% |
| 2 | 9.97 | 99.70% |
| 3 | 11.12 | 111.20% |
| 4 | 11.07 | 110.70% |
| 5 | 11.21 | 112.10% |
| 6 | 9.93 | 99.30% |
| 7 | 10.25 | 102.50% |
| 8 | 10.16 | 101.60% |
| 9 | 10.08 | 100.80% |
| 10 | 10.11 | 101.10% |
| अर्थ | 10.49 | / |
| सीवी% | 5.14% | / |
चित्र 3 10fg/μL HEK293 DNA (3G) qPCR परीक्षण परिणाम
3.6 मजबूती
इस किट का परीक्षण किया जा चुका है और यह निम्नलिखित उपकरणों के लिए उपयुक्त है, लेकिन इन्हीं तक सीमित नहीं है:
| विक्रेता | उपकरण मॉडल | प्रवर्धन क्षमताएं | आर2 | परिमाणीकरण की सीमा (fg/μL) | सीवी% |
| थर्मामीटरों | एबीआई 7500 | 102.84% | 1 | 10 | 7% |
| थर्मामीटरों | एबीआई क्वांटस्टूडियो5 | 104.70% | 0.999 | 10 | 9% |
| शंघाई होंगशी | स्लैन | 101.46% | 0.999 | 10 | 8% |
तालिका5 उपकरण उपयुक्तता परीक्षण परिणाम
3.7 स्थिरता
3.7.1 हिमीकरण-विगलन स्थिरता
HEK293 होस्ट सेल डीएनए अवशेष जांच किट (3G) का परीक्षण 10 बार दोहराया गया और ठंडा करके किया गया, और किट के प्रदर्शन पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा।
|
परीक्षण संकेतक जमने-पिघलने का समय | पैरामीटर | T0 समय | 10 बार जमाएं-पिघलाएं |
| मानक वक्र पैरामीटर | प्रवर्धन क्षमताएं | 99.34% | 100.78% |
| आर2 | 1 | 1 | |
| परिमाणीकरण की सीमा (30 fg/μL) | सीवी | 11% | 7% |
तालिका6 हिमीकरण-पिघलना स्थिरता परिणाम विश्लेषण
3.7.2 त्वरित स्थिरता
HEK293 होस्ट सेल डीएनए अवशेष जांच किट (3G) को क्रमशः 30 दिनों के लिए 2~8°C और 14 दिनों के लिए 37°C पर संग्रहीत किया गया। किट के प्रदर्शन पर कोई असर नहीं पड़ा।
|
परीक्षण संकेतक त्वरण तापमान और समय | पैरामीटर | T0 समय | 37℃ 7 दिन | 37℃ 14 दिन |
| मानक वक्र पैरामीटर | प्रवर्धन क्षमताएं | 103.83% | 101.58% | 100.47% |
| आर2 | 0.999 | 1 | 1 | |
| परिमाणीकरण की सीमा (30 fg/μL) | सीवी% | 8% | 5% | 5% |
तालिका7 त्वरित स्थिरता परिणाम विश्लेषण
3.8 रिक्त स्थान की सीमा
कोई टेम्पलेट नियंत्रण (एनटीसी) सीटी मानों के 96 पुनरावृत्तियों के साथ टेम्पलेट कमजोरीकरण नहीं था > 32 (प्लस आरओएक्स अंशांकन सीमा रेखा 0.06 पर सेट)।
चित्र 4 एनटीसी प्रयोग के परिणाम
- 4.संदर्भ
4.1 चीनी फार्माकोपिया आयोग (ChPC)। पीपुल्स रिपब्लिक ऑफ चाइना का फार्माकोपिया (वॉल्यूम 2) [एस]। बीजिंग: चाइना मेडिकल साइंस एंड टेक्नोलॉजी प्रेस, पृ.542-543, 2020।
4.2 एनएमपीए, 2007: जैविक उत्पादों के गुणवत्ता नियंत्रण के लिए विश्लेषणात्मक विधि सत्यापन की तकनीकी समीक्षा के लिए सामान्य सिद्धांत।
4.3 आईसीएच (2022)《विश्लेषणात्मक विधि सत्यापन Q2》, मसौदा संस्करण।
आदेश की जानकारी
| विवरण | भाग संख्या |
| 41332ईएस | |
| 41331ईएस | |
| 41307ईएस | |
| 41308ईएस | |
| 18461ईएस | |
| MycAway™ माइकोप्लाज्मा qPCR डिटेक्शन किट (2G) | 40619ईएस |