La contamination par aérosol dans l'environnement opérationnel comme cause la plus fréquente de faux positifs dans les résultats de PCR : la découverte pionnière de l'uracile ADN glycosylase (UDG) par le scientifique américain Lindahl dans E. coli et Bacillus subtilis, et l'établissement d'un système de prévention de la contamination par PCR grâce à l'utilisation de l'enzyme UDG avec dUTP.

Les enzymes UDG disponibles dans le commerce se composent principalement de deux types : les enzymes UDG classiques dérivées d'Escherichia coli et de Bacillus subtilis, et les enzymes UDG thermolabiles provenant de bactéries marines psychrophiles. Les enzymes UDG classiques présentent une plus grande résistance à la chaleur, conservant une petite quantité d'activité uracile-ADN glycosylase même après un traitement à 95 °C pendant 10 minutes, ce qui peut conduire à la dégradation des produits d'amplification cible contenant du dU. De plus, en raison de l'utilisation de souches bactériennes modifiées (telles que E. coli) pour l'expression recombinante d'enzymes moléculaires, il existe une certaine quantité d'ADN génomique hôte résiduel dans ces enzymes. Associés aux influences de l'environnement de fabrication et des sources humaines, les produits enzymatiques moléculaires sont très sensibles à la contamination par l'ADN. Lors de la détection d'agents pathogènes, l'ADN contaminant peut soit masquer des acides nucléiques cibles en faible abondance, soit être détecté à côté d'eux, affectant ainsi l'interprétation des résultats.

Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG) de Yeasen UCF.ME, thermolabile

Description

UCF.ME Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), thermolabile, 1 U/μL (Cat#14466ES) Dérivée de bactéries marines psychrophiles, il s'agit d'une enzyme UDG thermolabile à très faible résidu connue sous le nom d'UCF.ME. L'utilisation de ce produit peut empêcher l'activité résiduelle des enzymes UDG conventionnelles après inactivation de dégrader les produits d'amplification contenant du dU à température ambiante. Il empêche également les bactéries de fond présentes dans les enzymes moléculaires de provoquer des faux positifs dans les résultats de la PCR. Par conséquent, l'introduction de l'enzyme UDG thermolabile à très faible résidu UCF.ME® est cruciale pour identifier avec précision les agents pathogènes infectieux et aider au diagnostic clinique des infections et des maladies infectieuses.

Avantages du produit

• Résidu ultra-faible d’UCF.ME—résidu d’ADN génomique d’E. coli < 0,1 copie/U ;
• Faible résidu de nucléase : pas d’exonucléase résiduelle, d’enzyme de coupure ou d’ARNase ;
• Forte capacité de digestion : 0,05 U/T peut digérer 105 copies/T de produits dU-ADN ;
• Bonne thermolabilité : inactivation complète dans toutes les conditions de 50 °C pendant 10 minutes, 55 °C pendant 5 minutes ou 95 °C pendant 5 minutes ;
• Compatible avec les systèmes de réaction RT-qPCR — Aucun impact sur le système de détection, même à des niveaux d'entrée élevés (système de réaction 2U/20μL).

(1) Pureté des protéines ≥ 95 %