Under senare år har utvecklingen och tillämpningen av mRNA-teknologi fortsatt att väcka uppmärksamhet. mRNA-läkemedel involverar inokulering av mRNA som kodar för antigenproteiner i människokroppen. Genom att använda det genetiska materialet inuti mänskliga celler uttrycker och syntetiserar de antigenproteiner. Denna process inducerar och aktiverar kroppens immunsystem genom antigenproteiner, i syfte att förebygga och behandla sjukdomar. mRNA-läkemedel har fördelar som säkerhet, effektivitet och en kort cykel. De kan samtidigt inducera humoral och cellulär immunitet och har använts vid olika indikationer, inklusive tumörer, infektionssjukdomar, sällsynta sjukdomar, hjärt-kärlsjukdomar och mer.
Hela processen för utveckling av mRNA-läkemedel kan grovt delas in i flera steg:
Sekvensbestämning och design—mRNA in vitro-transkription—inkapslingspreparering
De konventionell steg för mRNA in vitro transkription (IVT) inkluderar:
Plasmid DNA-extraktion och linjärisering—Plasmid-DNA-rening—In vitro-transkription (co-transcriptional cappping)—Rening—mRNA-stamlösning
De enpotta mRNA in vitro transkription (IVT) process inkluderar:
Plasmid DNA-extraktion och linjärisering—In vitro-transkription (co-transkriptionell täckning)—Rening—mRNA-stamlösning
För närvarande involverar de flesta befintliga processer ett enda reningssteg för plasmid-DNA efter enzymatisk klyvning före IVT-steget. Yeasen Biotechlogy, baserat på ett mogent mRNA-applikationsutvecklingscenter, har utvecklat "Onepot mRNA Transcription"-processen. I denna process renas inte cirkulär plasmid-DNA efter enzymatisk klyvning; istället används den direkt för in vitro-transkription, vilket resulterar i en högkvalitativ mRNA-stamlösning. Hela denna process, samtidigt som den säkerställer produkt- och processkvalitet, förkortar varaktigheten av den befintliga processen.
Processfördelar:
- Processoptimering, minskar IVT-steg för enklare drift.
- Lägre materialkostnader, vilket eliminerar behovet av rening efter klyvning och kvalitetskontroll.
- Upprätthålla mRNA-kvalitet och -utbyte.
Data:
1. Avkastning och Integritet:
Med hjälp av 1μg linjäriserade 2K-, 4K- och 9K-plasmider kan onepot-processen generera 150-200μg mRNA.
| Längd | Avkastning | Integritet |
| 2K | 200 μg | 94,00 % |
| 4K | 185 μg | 92,20 % |
| 9K | 150 μg | 87,50 % |
Integritetstestning utfördes med användning av kapillärelektrofores (CE) för att bedöma integriteten hos fragment med längder på 2K, 4K och 9K. Integriteten för 2K- och 4K-fragment var >92% och integriteten för 9K-fragment var >87%.
2. Detektion av mRNA-täckningseffektivitet
LC-MS användes för att bedöma täckningseffektiviteten för 2K-sekvensen, vilket avslöjade en täckningseffektivitet på 99,5 %.
Översta bilden: HPLC UV-kromatogram
Nedersta bilden: Deconvoluted molekylviktsspektrum
3. Detektion av mRNA-polyadenyleringseffektivitet
LC-MS användes för att detektera polyadenyleringseffektiviteten hos prover, vilket visade resultat fördelade normalt.
Översta bilden: Vätskekromatografi TIC-kromatogram
Nedersta bilden: Deconvoluted molekylviktsspektrum
4.mRNA-uttryck Analysera
Transfektion av 293T-celler med mRNA-produkter syntetiserade med användning av både konventionell behandla (Vänster, linjäriserade plasmider wmed rening) och one-pot-processen (höger, linjäriserade plasmider utan rening) visade ingen skillnad i fluorescensproteinuttryck efter 24 timmars odling.
Beställningsinformation