---- Ren bakgrund, stabila bandmönster, exakta storlekar
DNA-markörer är en kombination av DNA-fragment med olika molekylvikter. Deras primära användning är att sammigrera med prov-DNA i agarosgelelektrofores för att separera DNA-molekylerna. Genom att jämföra storleken och ljusstyrkan hos provbanden med DNA-markörens, kan man grovt uppskatta molekylvikten och koncentrationen av provets DNA i lösning. YEASEN DNA-markörer täcker ett molekylviktsområde från 100 bp till 15 kb, vilket uppfyller behoven för de flesta experiment.
Produktegenskaper
- Stark stabilitet, kan förvaras i rumstemperatur i 3-6 månader;
- Ren bakgrund, stabila bandmönster och exakta storlekar;
- Innehåller referensband med kända koncentrationer för enkel positionering och semikvantitativ analys;
- Inkluderar laddningsbuffert för direkt elektrofores, bekvämt och snabbt;
- Levereras med en 5× laddningsbuffert för provladdning.
Elektroforesdiagram
Uppmärksamhetspunkter
- Förvaringsmetod: Stabil förvaring i rumstemperatur i 3 till 6 månader; under längre perioder, förvara vid 4°C eller -20°C.
- DNA Marker är lämplig för analys av DNA-band i agarosgelelektrofores och rekommenderas inte för användning i polyakrylamidgelelektrofores.
- Val av gelkoncentration och buffertlösning:
| Agarose koncentration | Effektivt separationsintervall (bp) | Rekommenderad buffert |
| 0,5 % | 2 000-50 000 | 1×TAE |
| 0,8 % | 800-10 000 | 1×TAE |
| 1,0 % | 400-8 000 | 1×TAE |
| 1,2 % | 300-7 000 | 1×TAE |
| 1,5 % | 200-3 000 | 1×TAE/0,5×TBE |
| 2,0 % | 100-2 000 | 1×TAE/0,5×TBE |
| 3,0 % | 25-1 000 | 0,5×TBE |
【Notera】: För stora fragment, välj en gel med låg koncentration och använd ett TAE-buffertsystem för elektrofores; för små fragment, välj en högkoncentrationsgel och använd ett TBE-buffertsystem för elektrofores.
- Val av nukleinsyrafläckar:
EB (Ethidium Bromide) är ett mycket känsligt fluorescerande färgämne med en maximal excitationsvåglängd på 302 nm, som kan användas för att observera nukleinsyror i agaros- och polyakrylamidgeler. EB interkalerar med baserna i nukleinsyror och är känt för att vara giftigt.
YeaRed (Cat#10202ES76) och YeaGreen (Cat#10204ES76) är nya giftfria nukleinsyrafärgämnen med en unik oljig molekylstruktur som inte kan penetrera cellmembran för att komma in i celler, är inte lättflyktiga eller sublimerbara och därför inte andas in av människor, vilket garanterar säkerheten för experimentet.Ames testresultat visar också att YeaRed och YeaGreen inte har någon mutagenicitet vid gelfärgningskoncentrationer, vilket gör dem till ett säkert och giftfritt alternativ till den mycket cancerframkallande EB. YeaRed har dessutom samma spektrala egenskaper som EB, så det kan perfekt ersätta EB utan att ändra det befintliga bildsystemet.
Frågor och svar
F1: Varför drar och separerar de högmolekylära banden i DNA-markören inte bra?
A1: Nukleinsyrafärgämnet binder inte tillräckligt med DNA-markören. Eftersom band med hög molekylvikt kräver mer nukleinsyrafärgämne, om färgämnet inte är mättat, är banden med hög molekylvikt mer mottagliga för migrationseffekter, vilket leder till dragning och dålig separation. Det rekommenderas att minska mängden DNA-markör som används (den kan spädas med vatten 5 gånger och sedan kan 8-10 μL laddas) eller att öka koncentrationen av nukleinsyrafärgämnet.
F2: Varför finns det inga band eller svaga band för DNA?
A2:
- Otillräcklig DNA-laddning, öka mängden laddad;
- DNA-bandet har tagit slut ur gelén;
- DNA-bandet är skymt av spårningsfärgämnet;
- Nukleinsyrafärgämne tillsattes inte till gelén;
- Agarosgelen har stått för länge, det rekommenderas att förbereda och använda den omedelbart.
F3: Varför är DNA-markörbanden diffusa?
A3:
- Partiell nedbrytning av DNA, kontrollera om lagringsförhållandena är för varma;
- Spänningen under elektrofores är för låg, vilket gör att DNA-banden diffunderar. Det rekommenderas att köra gelen vid 110V-130 V i mer än 45 min;
- Koncentrationen av agarosgelen är inte lämplig, förbered enligt den rekommenderade gelkoncentrationen i manualen;
- Kvaliteten på agarosgelen är dålig, det rekommenderas att förbereda en ny.
F4: Varför verkar provbanden vara av olika storlek jämfört med DNA-markörbanden?
A4:
- DNA-migrering är inte bara relaterad till den faktiska storleken utan också till om den är kombinerad med proteiner, jontillstånd, DNA-struktur, gel och andra faktorer. Den elektroforetiska migrationshastigheten för nukleinsyror är relaterad till förhållandet DNA/färgämne, och när mängden nukleinsyrafärgämne är otillräcklig kan det leda till större fel i migrationshastigheten;
- Om provet innehåller en hög koncentration av saltjoner kan det också orsaka betydande migrationsfel;
- Om mängden prov som laddas avsevärt skiljer sig från mängden DNA-markörband eller om volymerna skiljer sig markant, kan det också orsaka större migreringsfel.
Beställningsinformation
| Produktorientering | Produktnamn | Produktnummer | Specifikationer |
| DNA-markör | GoldBand DL2000 DNA-markör | 10501ES60/80 | 100 T/10×100 T |
| GoldBand DL5000 DNA-markör | 10504ES60/80 | 100 T/10×100 T | |
| GoldBand 100bp DNA-stege | 10507ES60/80 | 100 T/10×100 T | |
| GoldBand 1 kb DNA-stege | 10510ES60/80 | 100 T/10×100 T |