Описание фона
Очистка белка — это процесс выделения целевого белка из общего количества белков в экспериментальном образце с сохранением биологической активности и химической целостности целевого белка. Во время построения векторов, в дополнение к некоторым необходимым элементам экспрессии, также необходимо учитывать оптимизацию кодонов и выбор тегов. Выбор правильного тега не только полезен для очистки белка и повышения растворимости белка, но и не должен влиять на структуру и функцию белка и последующих приложений. В этом разделе основное внимание уделяется введению тегов His и GST.
Таблица 1. Его и тег GST Введение
| Ярлык | Размер кДа | Последовательность | Чистота | Растворимость | Удаление тега | Фермент расщепления тегов |
| Его | ~0,84 | ХХХХХХ | + | + | Не требуется | Протеаза TEV
|
| НДС | 26 | Состоит из 211 аминокислоты | ++ | ++ | Необходимый | 3C Протеаза/PSP |
Его аффинная очистка тегового белка
Агарозная смола HisSep Ni-NTA основана на высокосшитом агарозном геле в качестве матрицы, химически связанном с тетракоординированной нитрилотриуксусной кислотой (NTA) в качестве лиганда, и после хелатирования ионов никеля (Ni2+), он образует очень стабильную октаэдрическую структуру с ионами никеля в центре октаэдра. Эта структура может защищать ионы никеля от атак малых молекул. По сравнению со смолой Ni-IDA он более стабилен и может выдерживать определенные концентрации восстанавливающих агентов, денатурирующих агентов или связующих агентов в жестких условиях. По сравнению со смолой Ni-TED он имеет большую адсорбционную способность для целевых белков. Он стал одной из незаменимых смол для очистки His-меченых белков в лабораториях.
Рисунок 1. Принципиальная схема продукта смолы Гиса.
Таблица 2. Йесен Его руководство по выбору очищающих средств
| Номер продукта | 20502ES | 20503ES | 20504ES/20505ES | 20561ES |
| Название продукта | Агарозная смола HisSep Ni-NTA | Агарозная смола HisSep Ni-NTA 6FF | Хроматографическая колонка HisSep Ni-NTA 6FF, 5 мл/1 мл | HisSep Ni-NTA MagBeads |
| Матрица | Сшитый 6% агарозный гель | Высокосшитый 6% агарозный гель | Высокосшитый 6% агарозный гель | Магнитные агарозные микросферы |
| Сопротивление давлению | 0.1 МПа, 1 бар | 0.3 МПа, 3 бар | 0.3 МПа, 3 бар | Н/Д |
| Емкость | ＞40 мг 6×His-меченого белка/мл матрицы | ＞40 мг 6×His-меченого белка/мл матрицы | > 40 мг 6×His-меченого белка/мл магнитные шарики | |
| Предложение по очищению | Матрица со средней устойчивостью к давлению, подходит для метода инкубации, гравитационной колонны для мелкомасштабной очистки | Матрица с высокой устойчивостью к давлению может использоваться для промышленной крупномасштабной очистки белка с помощью оборудования для очистки белка. | Быстрая и удобная очистка белка с помощью магнитной сепарации | |
| толерантность | 8 М мочевина, 6 М соляная кислота, 0,5-1 мМ ДТТ, 1 мМ ЭДТА и т.д. | |||
| Приложение | Очистка гистидин-меченого белка является первым выбором, высокая нагрузка, средняя толерантность, особенно подходит для системы очистки прокариотической экспрессии. | |||
Приложение: Характеристики продукта HisSep Ni-NTA MagBeads (кат. № 20561ES)
- По сравнению с традиционными предварительно заполненными колонками и смолами нет необходимости в многократном центрифугировании образцов и контроле скорости потока образца, что значительно сокращает время очистки.
- Одноэтапная очистка позволяет достичь чистоты целевого белка более 95%.
- Высокий выход целевого белка: выход может достигать 70-80%.
- Можно использовать повторно до 5 раз.
- Легко регулировать концентрацию и объем целевого белка.
- Небольшая потеря белка и отсутствие риска денатурации или осаждения белка.
Среда для очистки аффинного белка GST-тега
Аффинная хроматография белка GST-метки использует ковалентное сродство между белком слияния GST и фиксированным глутатионом (GSH) через серные связи и очищает на основе принципа элюирования обмена GSH. При этой очистке глутатион соединяется с плечом геля через серную связь, а затем используется специфическая сила действия между глутатионом и глутатион S-трансферазой (т. е. GST-тегом), чтобы заставить белок слияния с меткой GST объединиться с глутатионом плеча на геле, тем самым отделяя меченый белок от других белков. Глутатион обычно имеет окисленную форму GSSG и восстановленную форму GSH. Когда мы используем элюирование GSH, GSH будет конкурировать с глутатионом геля за соединение с белком слияния, тем самым элюируя целевой белок.
GSTSep Glutathione Agarose Resin — это смола для очистки белка GST-тега, структурно изготовленная путем ковалентного химического соединения восстановленного глутатиона с 6% агарозным гелем в качестве матрицы через 12-атомную руку. Такая конструкция значительно повысила эффективность очистки смолы, что позволило ей переносить более 20 мг белка слияния GST на миллилитр среды. Продукт обладает хорошей специфичностью и экономичностью и может использоваться для очистки различных глутатион-S-трансфераз, глутатион-зависимых белков и рекомбинантных производных глутатиона за один этап.
Таблица 3. Йесен Руководство по выбору продукта для очистки GST
| Номер продукта | 20507ES | 20508ES | 20509ES/20510ES | 20562ES |
| Название продукта | GSTSep Глутатион Агарозная Смола | GSTSep Глутатион Агарозная Смола 4FF | Хроматографическая колонка GSTSep Glutathione 4FF, 1 мл / 5 мл | GSTSep Глутатион MagBeads |
| Матрица | Сшитый 6% агарозный гель | Высокосшитый 4% агарозный гель | Высокосшитый 4% агарозный гель | Магнитные агарозные микросферы |
| Сопротивление давлению | 0.1 МПа, 1 бар | 0.3 МПа, 3 бар | 0.3 МПа, 3 бар | Н/Д |
| Емкость | >20 мг белка GST (40 кДа)/мл матрицы | >10 мг белка GST (40 кДа)/мл матрицы | 5-10 мг белка слияния тегов GST/мл магнитных шариков | |
| Приложение | Высокая нагрузка, Матрица со средним сопротивлением давлению, подходит для метода инкубации, очистки в гравитационной колонне небольшого масштаба, рекомендуется для лабораторных заказчиков | Применение Низкая нагрузка, высокая устойчивость к давлению матрицы, может использоваться для промышленной крупномасштабной очистки белка с помощью прибора для очистки белка, легко масштабируется | Самая низкая нагрузка, быстрая и удобная очистка белка с помощью магнитной сепарации | |
Приложение: Характеристики продукта GSTSep Glutathione MagBeads (Cat#20562ES)
- Прямая очистка высокочистых целевых белков из биологических образцов посредством магнитной сепарации за один этап, что значительно упрощает процесс очистки и повышает эффективность очистки, подходит для удобной очистки белков слияния GST в научных исследованиях и промышленных областях.
- Использование этого магнитного шарика для экспериментов по GST Pull-down, поскольку магнитное разделение не требует многократного центрифугирования и длительного времени инкубации, делает операцию проще, быстрее и более автоматизированной по сравнению с традиционными методами хроматографии.
Информация о продукте
| Позиционирование продукта | Название продукта | Номер продукта | Спецификация |
| Его тег Очистка белка | Агароза HisSep Ni-NTA Смола | 20502ES10/50/60 | 10 мл/50 мл/100 мл |
| Агароза HisSep Ni-NTA Смола 6FF | 20503ES10/50/60 | 10 мл/50 мл/100 мл | |
| Хроматографическая колонка HisSep Ni-NTA 6FF, 5 мл | 20504ES08/25 | 5 мл/5x5 мл | |
| Хроматографическая колонка HisSep Ni-NTA 6FF, 1 мл | 20505ES03/08 | 1 мл/5x1 мл | |
| HisSep Ni-NTA MagBeads | 20561ES08/25 | 5 мл/25 мл | |
| Очистка белка тега GST | GSTSep Глутатион Агарозная Смола | 20507ES10/50/60 | 10 мл/50 мл/100 мл |
| GSTSep Глутатион Агарозная Смола 4FF | 20508ES10/50/60 | 10 мл/50 мл/100 мл | |
| Хроматографическая колонка GSTSep Glutathione 4FF, 1 мл | 20509ES03/08 | 1 мл/5x1 мл | |
| Хроматографическая колонка GSTSep Glutathione 4FF, 5 мл | 20510ES08/25 | 5 мл/5x5 мл | |
| GSTSep Глутатион MagBeads | 20561ES08/25 | 5 мл/25 мл |