ポリアクリルアミドゲル（PAGEゲル）は、タンパク質電気泳動においてタンパク質分離を実現するためによく用いられます。このゲルは、一般的に濃縮ゲルと分離ゲルから構成されます。前者はタンパク質サンプルを濃縮する役割を果たし、後者はゲル中に含まれるアクリルアミドモノマーとN,N-メチレンビスアクリルアミド（メチレンアクリルアミド）架橋剤の濃度に応じて、異なるサイズのタンパク質を分離します。

このキットには、PAGEゲルを迅速に作製するために必要な様々な試薬が含まれています。ユーザーはご自身でゲル作製器具を準備するだけでゲルを作製できるため、ゲル作製プロセスが大幅に簡素化されます。本キットで作製したゲルは、変性PAGEゲル電気泳動にのみ使用できます。この仕様では、約125枚のミニゲル（0.75 mm厚ゲル換算）を作製できます。

仕様

コンポーネント

配送と保管

商品は保冷剤と一緒に発送され、2 ℃ ～8 ℃で1年間保存できます。

説明書： 上部溶液の追加が遅れるのを避けるために、一度にゲルをあまり多く設定しないことをお勧めします（最大で2〜3個が推奨されます）。

1.標的タンパク質の分子量に応じて適切なゲル濃度を選択する（表1参照）

2.ゲル作成プロセス（0.75 / 1.0 / 1.5 mmのミニゲルを例に挙げます）

2.1 分離ゲル緩衝液と分離ゲル溶液を等量取り、混ぜます。つまり、2 つの溶液をそれぞれ 2.0/2.7/ 4.0 mL 取ります。

2.2 過硫酸アンモニウム0.1gを量り取り、1mLの脱イオン水に溶解します。過硫酸アンモニウムはお客様ご自身でご用意ください。

2.3 手順 1 の混合溶液に APS 35/45/70 μL を加え (固化が速すぎる場合は、使用する APS の量を半分に減らすことができます)、完全に混合します。

2.4 手順2の溶液をゲル作製用ガラス板に注入する。分離ゲルを添加してから2分以内に濃縮ゲルをゲル型に注入する。濃縮ゲルと分離ゲルが混ざらないように、濃縮ゲルの注入はゆっくりと行う。成形が難しい場合は、エタノールで密封した後に濃縮ゲルを成形することもできる。

2.5 濃縮ゲルの調製：濃縮ゲル緩衝液と濃縮ゲル溶液を等量、すなわちそれぞれ 0.5/0.75/1.0 mL ずつ取り、その後 10/13/18 μL の APS を加えてよく混ぜます。

2.6 ゲル製造ガラス板に注入し、櫛歯を差し込みます（櫛歯を優しく差し込むため、過度の力を加えないでください）。

2.7 濃縮ゲルを15分間固化させた後、コーム歯を取り外して電気泳動に使用できます。注：電気泳動バッファーは必ず新しく調製したものを使用してください。

注記

1. 電気泳動中の電圧は100～120 Vにすることをお勧めします。電気泳動速度を加速する必要がある場合は、150 Vまで上げることができます。

2. ゲルを充填する前に、ゲル溶液を室温に戻して（たとえば、数分間そのままにして）、ゲル内の気泡の発生を効果的に防ぎます。

3. 過硫酸アンモニウムはお客様ご自身でご購入いただく必要があります。シグマ社製カタログ番号A3678の製品をご使用いただくことをお勧めします。

4. 過硫酸アンモニウム溶液の量はあくまでも参考値であり、実際の量は個人の実験習慣や経験に応じて増減できます。過硫酸アンモニウムを多く添加するとゲル化速度が速まり、逆に少なくなるとゲル化速度が速まります。PAGEゲルの凝固速度は、温度と過硫酸アンモニウムの量に密接に関連しています。

5. 本製品には適量のTEMED代替物が添加されています。ゲル化速度をさらに加速する必要がある場合は、分注前に必要に応じて適量のTEMEDを添加することができます。

6. ゲルの凝固と温度の間には有意な正の相関関係があり、同じ条件下では温度が高いほど凝固速度は速くなります。

7. カラー濃縮ジェルは保管中に少量の沈殿が生じる場合がありますが、これは正常な現象です。ご安心してご使用ください。

8. APSは-20 ℃で保管されていましたが、開封後使用中のAPSは利便性を考慮し、4 ℃で保管できます。

9. 健康と安全を確保するために、白衣や手袋などの必要な個人用保護具を着用してください。

10. 研究目的のみに使用してください。

表1異なる濃度におけるSDS-PAGEゲルの参照分離範囲

 文書:

安全データシート

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20327- B -MSDS-CN20250110

20327- C -MSDS-CN20250110

20327- D -MSDS-CN20250110

マニュアル

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