CRISPR/Cas9は、RNA誘導性Casヌクレアーゼを用いて標的遺伝子に特異的なDNA修飾を行う技術です。これは、細菌や古細菌がファージや外来プラスミドの攻撃に対抗するために進化させた獲得免疫防御機構です。このシステムでは、人工的に最適化されたシングルガイドRNA（sgRNA）によってCas9ヌクレアーゼが誘導され、標的部位で二本鎖DNA（dsDNA）を切断することでDNA切断を引き起こします。その後、生体内では非相同末端結合または相同修復機構によってDNAが修復され、フレームシフト変異、遺伝子の置換または欠失が起こります。

Hifair™ Precision sgRNA合成キットは、T7 RNAポリメラーゼ混合物を用いてspCas9 sgRNAを効率的に転写します。キットには、Cas9タンパク質によって認識され、スキャフォールドとして機能する特定の配列が含まれています。この配列の一部は、ユーザーが設計した標的特異的配列と部分的に重複させることができます。相補鎖はDNAポリメラーゼによって補完され、転写用のdsDNAテンプレートが生成されます。付属の試薬とユーザーが設計した特定のDNA配列を用いることで、キットは1本のチューブで4時間以内に20～100μgの機能的なsgRNAを得ることができます。

特徴

高い合成収率– わずか 4 時間以内に 1 本のチューブで 20～100 µg の sgRNA を合成できます。

幅広い適用性- さまざまな sgRNA 配列およびターゲット タイプにわたって一貫して高い収量を実現します。

卓越した純度- 明確な単一バンドを持つ sgRNA を生成し、副産物を最小限に抑えます。

実証済みの機能活性- 合成された sgRNA は Cas9 を介した DNA 切断を効率的に誘導します。

アプリケーション

• CRISPR/Cas9 ゲノム編集;
• インビトロ切断アッセイ;
• 機能ゲノミクス研究;
• 遺伝子治療研究;

コンポーネント

配送と保管

この製品は-25〜-15℃で2年間保管する^必要があります。

数字

1. 高い合成収率

図1. 異なる反応時間におけるsgRNA収量。HifairTM Precision sgRNA合成キットを用いることで、1本のチューブで4時間以内に20～100µgのsgRNAを合成でき、ゲノム編集アプリケーションの要件を完全に満たします。

2. 幅広い互換性 - さまざまな sgRNA タイプにわたって高い収量を実現します。

図2. 異なるsgRNAタイプの合成収量。HifairTM Precision sgRNA合成キットを用いて、10種類の異なるsgRNAを並行して合成した。結果は、このキットが複数のsgRNAタイプにおいて一貫して高い収量をもたらし、多様な遺伝子編集アプリケーションのニーズを満たすことを示している。

3. 高純度 - 合成された sgRNA は、不純物が最小限で、単一の明確なバンドを示します。

図3. 合成sgRNAの品質評価（Agilent 2100）。HifairTM Precision sgRNA合成キットを用いて合成したsgRNAをAgilent 2100システムで分析した。結果は、二次ピークのない明瞭な単一ピークを示しており、高純度であることが示された。

4. 高活性 - Cas9 ヌクレアーゼを効果的に誘導し、標的 DNA を高効率で切断します。

図4. 合成sgRNAの切断効率。HifairTM Precision sgRNA合成キットを用いて合成したsgRNAをCas9ヌクレアーゼと組み合わせ、標的DNAをin vitroで切断した。アガロースゲル電気泳動により、合成sgRNAがCas9を効果的に誘導し、標的部位を切断することで、期待されるサイズのDNA断片が生成されたことが示された。

文書:      

安全データシート

1 1355 _MSDS_ Ver.EN202 50625 .pdf

マニュアル

1 1355 _マニュアル_Ver.EN 20240710 .pdf