近年、分子生物学技術の急速な発展に伴い、核酸を用いた診断法が確立され、ヒト疾患の臨床検査に広く応用されています。他の核酸増幅法と比較して、等温増幅法は迅速性、効率性、特異性が高く、特殊な機器を必要としないという利点があります。そのため、登場以来、多くの研究者からPCRに匹敵する可能性のある検出法として注目されてきました。
その結果、等温増幅技術に基づく診断機器およびキットの開発と応用は、分子診断におけるポイントオブケア検査 (POCT) の新たな方向性を示すものになると考えられています。
主流の等温増幅技術の原理の紹介
1.ループ介在等温増幅（LAMP）技術
原理：ループ介在等温増幅（LAMP）法は、鎖置換活性を持つBstDNAポリメラーゼを利用します。標的遺伝子の6つの領域を標的とする4種類の特異的プライマーを設計することで、等温条件下で標的配列を効率的、迅速かつ特異的に増幅します。増幅は60～65℃の一定温度で行われ、15～60分以内に10 9 ～10 10倍の核酸増幅を達成できます。
利点と応用：等温増幅法は、反応が速く、特異性が高く、装置がシンプルで操作が簡単で、結果の解釈が容易なため、病原細菌、寄生虫、ウイルス、疾患、遺伝子組み換え製品の検出に応用されています。また、臨床感染症診断、環境モニタリング、食品安全などの分野でも広く利用されることが期待されており、分子ポイントオブケア検査（ POCT ）プラットフォームに適した理想的な方法となっています。
分類： LAMP検出法は、濁度測定法、pH指示薬法、蛍光色素法（NHB、カルセイン、SYBR Green、Sytoなど）、蛍光プローブ法など、いくつかの種類に分類されます。
2.リコンビナーゼポリメラーゼ増幅（RPA）技術
原理：リコンビナーゼ酵素はプライマーに結合すると、二本鎖DNA中の相同配列を検索できるタンパク質-DNA複合体を形成します。プライマーが相同配列を見つけると、鎖交換反応が起こり、DNA合成が開始されます。これにより、鋳型上の標的領域が指数関数的に増幅されます。置換されたDNA鎖は、それ以上の置換を防ぐために一本鎖結合タンパク質（SSB）に結合します。このシステムでは、2つの相反するプライマーによって合成が開始され、主にリコンビナーゼ、Bsu酵素、およびSSBタンパク質の活性に依存します。この技術は、37～42℃の温度範囲で10～30分以内に目的の標的を迅速に検出することを可能にします。
利点と用途： RPAは、高い感度、高い特異性、特殊機器への依存度が低いこと、そして様々な検出フォーマットを統合できることを特長としています。特に、草の根レベルや現場でのPOC検査に適しています。RPAは、体外診断、動物疾病、食品安全、バイオセーフティ、農業などの分野で幅広く応用できます。
分類： RPA 検出法は、ゲル電気泳動法、EXO プローブ法、Fpg プローブ法、ラテラルフローディップスティック法 (LF-RPA)、凝集分析法など、いくつかの種類に分類されます。
製品パフォーマンス
1. RT-LAMP pH感受性色素試薬
pH感度色素RT-LAMP法は、60～65℃の等温条件下で、可視色素を高感度指示薬として用い、恒温水槽または標準的なPCR装置を用いてワンステップRNA核酸増幅を実現します。わずか30分で反応後、色の変化から病原体感染の有無を判定でき、より直感的な結果（陽性はオレンジイエロー、陰性はマゼンタ）が得られます。この方法は、大規模な集団の迅速検査に適しています。
おすすめ商品：
RT-LAMP pH感受性染料キット（13906ES）
RT-LAMP pH感受性色素発色性バージョン凍結乾燥キット（13920ES）
パフォーマンス：
2. RT-LAMP蛍光色素試薬
蛍光色素法RT-LAMP法では、蛍光色素（SYBR Green、Sytoなど）を蛍光マーカーとして用います。増幅反応中に二本鎖DNAに結合し、蛍光シグナルが800～1000倍に増強されます。蛍光定量PCR装置を用いて、60～65℃の等温条件下で検査を行い、約30分後に増幅結果から病原体感染の有無を判定します。この方法は、マイクロ流体チップや携帯型検出器と組み合わせることで、迅速な検査も可能です。
おすすめ商品：
RT-LAMP 色素アッセイキット（UDGplus）（13762ES）
パフォーマンス：
製品選択ガイド
1.RT-LAMP/RPAミックス選択ガイド
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製品分類 |
RT-LAMPミックス |
RPAミックス |
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製品名 |
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製品品番 |
13762ES |
16702ES |
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製品カテゴリー |
蛍光染料 |
プローブ |
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製品コンポーネント |
2つのコンポーネント バッファー、酵素ミックス |
4つのコンポーネント 緩衝液、酵素ミックス、酢酸マグネシウム |
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凍結乾燥対応 |
いいえ |
いいえ |
2.LAMP/RT-LAMP酵素選択ガイド
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製品分類 |
Bst酵素 |
逆転写酵素 |
UDG酵素 |
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製品名 |
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製品品番 |
14402ES |
14405ES |
11111ES |
14455ES |
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酵素活性 |
40 U/μL |
60 U/μL |
200 U/μL |
1単位/μL |
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製品コンポーネント |
3つのコンポーネント |
2つのコンポーネント |
2つのコンポーネント |
シングル- 成分 |
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凍結乾燥対応 |
いいえ |
はい |
いいえ |
いいえ |
3、RPA酵素選択ガイド
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製品分類 |
T4 X |
T4 Y |
SSB |
エクソ |
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製品名 |
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製品品番 |
11079ES |
11080ES |
11081ES |
14525ES |
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酵素活性 |
2μg/μL |
2μg/μL |
5μg/μL |
100 U/μL |
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製品コンポーネント |
単一成分 |
単一成分 |
単一成分 |
2つのコンポーネント |
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凍結乾燥対応 |
いいえ |
いいえ |
いいえ |
いいえ |