親愛なる友人の皆さん、タンパク質の免疫ブロット中にさまざまなローディングコントロール抗体とエピトープタグ付け抗体に直面して途方に暮れていませんか？ローディングコントロールタンパク質は、生物のハウスキーピング遺伝子によってコード化され、複数の組織で安定的に発現しています。免疫学的実験が正常に進行しているかどうかを確認するため、およびタンパク質発現の半定量的検出基準として使用されます。では、ローディングコントロール抗体を正しく選択するにはどうすればよいでしょうか？次の点を参考にしてください。

I. サンプル種の起源

1. 哺乳類の組織または細胞からのサンプルの場合、通常は β-アクチン、α-チューブリン、GAPDH、ラミン B、ヒストン H3、Na+/K+-ATPase を選択します。
2. 植物由来のサンプルの場合は、通常、植物アクチン、Rubisco などを選択します。
3. 研究があまり行われていないその他のサンプルについては、関連する文献やデータベースを参照して、適切なタンパク質を内部参照として選択します。

検出中の干渉を防ぐために、ターゲットタンパク質の分子量がローディングコントロールの分子量と 5KDa 以上異なることを確認してください。たとえば、ターゲットタンパク質が 40KDa の場合、ローディングコントロールとして β-アクチン (42KDa) を選択するのは適切ではありません。ローディングコントロールとして GAPDH (36KDa) または β-チューブリン (55KDa) の使用を検討してください。

III. 内部参照タンパク質の発現部位

ラベル抗体は一緒に使用するとより効果的です

プルダウンなどのタンパク質相互作用を研究する実験では、分子生物学的手法によってエピトープ タグを標的タンパク質の N 末端または C 末端に融合することができます。一般的に使用されるエピトープ タグには、His、HA、Myc、GST などがあります。これらのエピトープ タグは通常、標的タンパク質の生物学的活性と細胞内局在に影響を与えません。エピトープ タグの出現により、科学研究と工業生産に利便性がもたらされました。

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