Ribonuklease A (RNase A) ist ein einzelsträngiges Polypeptid mit vier Disulfidbrücken und einem Molekulargewicht von etwa 13,7 kDa. RNase A ist eine Endoribonuklease, die spezifisch einzelsträngige RNA an C- und U-Resten abbaut. Die Spaltung erkennt insbesondere die Phosphodiesterbindung zwischen der 5'-Ribose eines Nukleotids und der Phosphatgruppe an der 3'-Ribose des benachbarten Pyrimidinnukleotids, sodass die 2', 3'-zyklischen Phosphate zu den entsprechenden 3'-Nukleosidphosphaten hydrolysiert werden (z. B. wird pG-pG-pC-pA-pG durch RNase A gespalten, um pG-pG-pCp und A-PG zu erzeugen). RNase A ist am aktivsten bei der Spaltung einzelsträngiger RNA. Die empfohlene Arbeitskonzentration beträgt 1–100 µG/ml und ist mit verschiedenen Reaktionssystemen kompatibel. Niedrige Salzkonzentrationen (0–100 mM NaCl) können zum Schneiden von einzelsträngiger RNA, doppelsträngiger RNA und durch RNA-DNA-Hybridisierung gebildeten RNA-Ketten verwendet werden. Bei hohen Salzkonzentrationen (≥ 0,3 M) spaltet RNase A jedoch nur spezifisch einzelsträngige RNA.

RNase A wird am häufigsten zur Entfernung von RNA bei der Herstellung von Plasmid-DNA oder genomischer DNA verwendet. Die Aktivität von DNase während des Herstellungsprozesses kann die Reaktion leicht beeinflussen. Die traditionelle Methode des Kochens im Wasserbad kann die DNase-Aktivität inaktivieren. Dieses Produkt enthält weder DNase noch Protease und erfordert vor der Verwendung keine Wärmebehandlung. Darüber hinaus kann dieses Produkt auch in molekularbiologischen Experimenten wie der RNase-Schutzanalyse und der RNA-Sequenzanalyse eingesetzt werden.

Dieses Produkt wird als Lösung mit einer Konzentration von 100 mg/ml geliefert. Die empfohlene Arbeitskonzentration beträgt je nach Anwendungsart 1–100 μg/ml.

Merkmale

Ribonuklease A (RNase A), aus Rinderpankreas

Aktivität ≥80 Kunitz U/mg

NEIN DNase-Rückstand

Anwendungen

RNasen

Epitranskriptomanalyse

Extraktion und Reinigung genomischer DNA

Technische Daten

Versand und Lagerung

Das Produkt sollte 2 Jahre lang bei -25 °C bis -15 °C gelagert werden.

Der Konservierungspuffer bestand aus 50 mM Tris-HCl (pH 7,4) und 50 % (V/V) Glycerin.

Zahlen

Probe 1 hat keine RNase A, Probe 2-4 haben 1 μl des 100 mg/ml RNase A. Dann 500 ng RNA hinzufügen. Nach 5-minütiger Inkubation bei Raumtemperatur 1 μl 10X RNA-Ladepuffer hinzufügen. Anschließend alle Proben auf ein 0,8%iges Agarosegel mit mittleren Poren auftragen und 10 Minuten lang bei 160 V elektrophoretisch auflösen.

Unterlagen:

Sicherheitsdatenblatt

10406ES-MSDS-HB240223.PDF

Benutzerhandbücher

10406_Manual_Ver. HB240703_DE.pdf

Zitate und Referenzen:

[1] Chen Q, Xin M, Wang L, et al. Die Hemmung von LDHA zur Induktion der eEF2-Freisetzung verstärkt die Thrombozytopoese. Blut. 2022;139(19):2958-2971. doi:10.1182/blood.2022015620(IF:23.629)

[2] Chen K, Guo T, Li XM, et al. Translationale Regulierung der pflanzlichen Reaktion auf hohe Temperaturen durch eine tRNAHis-Guanylyltransferase mit Doppelfunktion in Reis. Mol Plant. 2019;12(8):1123-1142. doi:10.1016/j.molp.2019.04.012(IF:10.812)