Ty thể
Ty thể là nhà máy năng lượng của tế bào, là nơi chính của quá trình phosphoryl hóa oxy hóa nội bào và tổng hợp adenosine triphosphate (ATP), cung cấp năng lượng cho các hoạt động của tế bào. 95% năng lượng cần thiết cho các hoạt động sống của tế bào đến từ ty thể. Ngoài việc cung cấp năng lượng cho tế bào, ty thể còn tham gia vào các quá trình như biệt hóa tế bào, truyền thông tin tế bào và apoptosis, và có khả năng điều chỉnh sự phát triển của tế bào và chu kỳ tế bào. Do đó, các xét nghiệm như ty thể và màng ty thể là một phần thiết yếu của nghiên cứu về tế bào.
Định nghĩa và tầm quan trọng của điện thế màng ty thể
Điện thế màng ty thể là kết quả của sự phân bố điện tích ở cả hai bên màng ty thể trong và là yếu tố chính trong việc duy trì chức năng bình thường của ty thể. Trong ty thể, chuỗi vận chuyển điện tử tạo ra một gradient proton thông qua các phản ứng oxy hóa khử thúc đẩy quá trình tổng hợp ATP. Sự ổn định của điện thế màng ty thể liên quan trực tiếp đến nguồn cung cấp năng lượng của tế bào và trạng thái sống còn của tế bào. Một số lượng lớn các nghiên cứu đã chỉ ra rằng ty thể có liên quan chặt chẽ đến quá trình apoptosis, trong đó sự giảm điện thế xuyên màng ty thể được coi là một trong những sự kiện sớm nhất trong quá trình phản ứng chuỗi apoptosis. Nó xảy ra trước khi xuất hiện các đặc điểm apoptosis (ngưng tụ chromatin, đứt gãy DNA) trong nhân và một khi điện thế xuyên màng ty thể sụp đổ, quá trình apoptosis là không thể đảo ngược. Do đó, sự giảm điện thế màng ty thể là một sự kiện đặc trưng trong giai đoạn đầu của quá trình apoptosis.
Nguyên lý hoạt động của đầu dò JC-1
JC-1 là thuốc nhuộm huỳnh quang lipid cation, có thể được sử dụng như một chỉ báo về tiềm năng xuyên màng ty thể. JC-1 tồn tại ở hai trạng thái, monome và đame. Ở nồng độ thấp, nó tồn tại dưới dạng monome và có thể phát hiện huỳnh quang màu xanh lá cây, và khi phát hiện bằng xét nghiệm dòng chảy, nó thường nằm trong kênh FL-1 (cùng kênh với FITC). Ở nồng độ cao, nó tồn tại dưới dạng đa phân tử và có thể phát hiện được ánh sáng đỏ, và khi được phát hiện bằng xét nghiệm dòng chảy, nó thường nằm trong kênh FL-2 (cùng kênh với PE). JC-1 cũng có thể được sử dụng như một thuốc nhuộm huỳnh quang lipid cation và có thể được sử dụng như một chỉ báo điện thế xuyên màng ty thể. và kênh PE giống nhau). Do sự thay đổi nồng độ JC-1, một quá trình chuyển đổi thuận nghịch giữa monome và đame được hình thành.
Trong tế bào bình thường, khi điện thế màng bình thường, JC-1 đi vào ty thể thông qua phân cực màng ty thể và tạo thành các đa phân tử huỳnh quang đỏ do nồng độ tăng, trong khi ở tế bào chết theo chương trình, điện thế xuyên màng ty thể bị khử cực và JC-1 được giải phóng khỏi ty thể ở nồng độ giảm và đảo ngược thành dạng monome huỳnh quang xanh lục. Do đó, những thay đổi trong điện thế màng ty thể có thể được phát hiện bằng cách phát hiện huỳnh quang xanh lục và đỏ.
Lưu ý: Hình ảnh trích dẫn từ internet
Đầu dò JC-10
JC-10, một dẫn xuất của JC-1, là một đầu dò phụ thuộc vào điện thế được sử dụng để xác định điện thế xuyên màng ty thể bằng phương pháp đo lưu lượng tế bào, kính hiển vi huỳnh quang và xét nghiệm huỳnh quang dựa trên tấm vi mô. Trong các tế bào khỏe mạnh, JC-10 tích tụ có chọn lọc trong ty thể, tạo ra các tập hợp màu đỏ thể hiện phổ kích thích rộng và phát ra các giá trị lớn ở 590 nm.Tuy nhiên, trong các tế bào chết theo chương trình và hoại tử có tiềm năng xuyên màng ty thể thấp, JC-10 khuếch tán ra khỏi ty thể và tạo ra các monome JC-10, dẫn đến sự dịch chuyển về phía phát xạ xanh lục (525 nm). Nó đã được sử dụng thành công như một chỉ báo về tiềm năng xuyên màng ty thể trong nhiều loại mẫu khác nhau bao gồm tế bào cơ, tế bào thần kinh, mô nguyên vẹn và ty thể bị cô lập.
JC-10--Thay thế cho JC-1
- Tính ổn định: JC-10 có độ sai lệch phát hiện thấp hơn vì có độ hòa tan cao hơn và độ nhạy cao hơn trong môi trường nước.
- Tín hiệu được cải thiện: JC-10 có tỷ lệ tín hiệu trên nền cao hơn JC-1.
- Độ nhạy được cải thiện: JC-10 có khả năng phát hiện những thay đổi nhỏ trong tình trạng mất điện thế xuyên màng ty thể tốt hơn JC-1 trong tất cả các dòng tế bào được thử nghiệm.
- Ứng dụng rộng rãi: JC-10 có thể được sử dụng trong tế bào gan nguyên phát của chuột.
- Tiện lợi: JC-10 tương thích với các chất đánh dấu enzym huỳnh quang, máy chụp ảnh tế bào và máy đo lưu lượng tế bào.
Ghi chú:. Những thay đổi về điện thế màng ty thể do comedone gây ra được đo trong tế bào Jurkat bằng JC-10 và JC-1. Sau khi xử lý tế bào Jurkat bằng camptothecin (10 mM) trong 4 giờ, dung dịch lấy mẫu thuốc nhuộm JC-1 và JC-10 được thêm vào giếng và ủ trong 30 phút. Cường độ huỳnh quang của các dạng kết tụ và dạng đơn phân của JC-1 và JC-10 được đo ở Ex/Em = 490/525 nm và 490/590 nm bằng máy đánh dấu enzyme NOVOstar (BMG Labtech).
Phân tích kết quả
Khi phát hiện monome JC-1, ánh sáng kích thích có thể được đặt ở 490 nm và ánh sáng phát xạ có thể được đặt ở 530 nm; khi phát hiện polyme JC-1, ánh sáng kích thích có thể được đặt ở 525 nm và ánh sáng phát xạ có thể được đặt ở 590 nm. Quá trình apoptosis được phát hiện bằng phương pháp đo lưu lượng tế bào, huỳnh quang xanh được phát hiện thông qua kênh FL-1 và huỳnh quang đỏ được phát hiện thông qua kênh FL-2. FL-1+, FL-2+ là tế bào bình thường và FL-1+, FL-2- là tế bào chết theo chương trình.
Lưu ý: Nguồn hình ảnh là diễn đàn trang web của Hiệp hội tinh giản Trung Quốc
Hoạt động không có nghi ngờ
Hỏi: Đầu dò huỳnh quang tiềm năng màng ty thể JC-1, sản phẩm này có thể được sử dụng để nhuộm phần mô không?
A: Phân hủy mô sống thành từng tế bào riêng lẻ để đảm bảo hoạt động của tế bào trước khi nhuộm.
H: Tôi có thể cố định tế bào trước khi nhuộm bằng JC-1 không?
A: Không. Thuốc nhuộm JC-1 tích tụ trong ty thể theo cách phụ thuộc vào điện thế và có thể được sử dụng để phát hiện tế bào, mô hoặc điện thế màng ty thể tinh khiết. Việc bất động làm gián đoạn điện thế, dẫn đến việc đầu dò không thể tích tụ trên ty thể và mất tính đặc hiệu.
Hỏi: Có những hạt kết tụ trong dung dịch làm việc JC-1 và tôi dự định loại bỏ chúng bằng cách ly tâm trước khi nhuộm, có thông số nào được khuyến nghị cho quá trình ly tâm không?
A: Dung dịch làm việc JC-1 có thể được ly tâm ở tốc độ 13.000 g trong khoảng 1-2 phút.
Thông tin đặt hàng
| Tên sản phẩm | Mã số mặt hàng | Đặc điểm kỹ thuật |
| 40705ES03/08 | 1mg/5mg | |
| 40707ES03/08 | 1mg/5mg |