선형화된 폴리에틸렌이민 PEI 25000 형질전환 시약은 음전하를 띤 핵산 분자와 쉽게 결합하여 복합체를 형성하고, 이 복합체가 세포 내로 유입되도록 하는 고하전성 양이온성 중합체입니다. 이 형질전환 시약은 HEK293 및 CHO와 같은 세포에서 낮은 세포독성, 높은 형질전환 효율, 그리고 높은 유전자 발현 효율을 갖는 일시적 형질전환 시약입니다. 선형 PEI 형질전환 시약은 HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2, Hela 세포 등 다양한 세포주에 광범위하게 적용 가능한 것으로 검증되었습니다. 이 시약은 혈청이 포함된 배지와 호환되며 핵산을 세포 내로 효율적으로 도입할 수 있습니다.

사양

배송 및 보관

본 제품은 실온으로 배송되며, 분말은 2~8ºC에서 2년간 보관 가능합니다. 원액은 2~8ºC에서 3개월간 보관 가능합니다.

주의 사항

1) 제조된 PEI 용액을 -20ºC에서 꺼내 해동한 후에는 4ºC 냉장고에 보관해야 하며 재냉동해서는 ​​안 됩니다.

2) 대부분의 세포에서 DNA 1μg당 PEI 형질전환 시약 3.0μL를 사용하면 높은 형질전환 효율을 얻을 수 있습니다. 최적화를 위해 DNA 1μg당 선형 PEI 형질전환 시약 1.5~4μL를 사용해 볼 수도 있습니다.

3) 안전과 건강을 위해 작업 시에는 실험실 가운, 일회용 장갑, 환기 후드를 착용해 주시기 바랍니다.

4) 본 제품은 과학적 연구 목적으로만 사용되며, 인체에 사용하기에는 적합하지 않습니다.

스톡 용액 제조(1 mg/mL)
1. 재료

PEI 25000, Milli-Q® 정제수/주사용 정제수(WFI) 또는 이와 유사한 생물학적 등급 정제수, 12 mol/L 염산(HCl), 10 mol/L 수산화나트륨(NaOH), 일회용 0.1~0.2 μm PES 진공 살균 필터, 살균 HDPE 또는 폴리프로필렌 보관 병.

2. 원액(1 mg/mL)을 준비합니다.

1) 1L 유리 비커에 PEI 25000 분말 1g을 Milli-Q® 초순수 또는 이와 동등한 생물학적 물 900mL에 넣고 자석 교반기로 고르게 저어 작은 소용돌이를 만듭니다.

2) pH가 2.0 미만이 될 때까지 저으면서 염산(12 mol/L)을 적하하여 조절한다.

3) 비커의 윗부분을 덮고 완전히 녹을 때까지 3시간 동안 저어줍니다. 이 과정 전체에 걸쳐 pH를 2.0 미만으로 유지합니다.

【주의사항】: 녹지 않는 작은 섬유질 입자가 있을 수 있는데, 이는 정상적인 현상입니다.

4) pH가 6.9 ~7.1이 될 때까지 교반하면서 NaOH(10 mol/L)를 적하하여 조절한다.

5) 용액을 메스실린더에 옮기고, 물을 넣어 1L가 되도록 합니다.

6) 일회용 0.1-0.2 µm PES 진공 필터로 여과 및 살균하여 1 mg/mL의 원액을 얻습니다.

7) 필요에 따라 나누어 -20 °C에 보관하면 1년간 안정합니다.

【주의사항】: 보관용액을 재해동한 후 4℃에서 보관하면 2주간 안정하나 재냉동은 불가합니다.

형질감염 절차(6-well plate를 예로 들어)
1. 세포 접종: 형질감염 효율을 높이기 위해 형질감염 하루 전에 세포를 접종하는 것이 좋으며, 형질감염 시점의 세포 밀도는 바람직하게는 70%~80%입니다.

2. DNA-PEI 복합체 준비: 다음 시스템에 따라 DNA-PEI 핵산-전사 시약 복합체를 준비합니다.

1) 각 세포 웰에 대해 2μg의 표적 DNA를 100μL의 무혈청 배지로 희석하고, DNA 희석액이 될 때까지 완전히 혼합합니다.

[참고]: 혈청 무첨가 희석제에는 Opti-MEM 또는 ddH2O를 권장합니다.

2) PEI 25000 형질전환 시약 5 μL를 DNA 희석액 100 μL에 즉시 첨가하고 10초간 교반한 후 잘 섞습니다.

3) 10~25분 동안 실온에서 배양하여 DNA-PEI 양이온 핵산 형질감염 시약 복합체를 형성합니다.

3. 형질전환된 세포:

1) 복합체 형성 중에 세포 성장 배지를 제거하고 각 웰에 2mL의 신선하고 예열된 완전 배지를 첨가합니다.

2) 100 μL DNA-PEI 핵산-PEI 복합체를 세포에 직접 첨가하고 배양판을 흔들어 부드럽게 섞습니다.

3) 37°C, 5% CO2 배양기에서 배양하면 형질전환 후 7시간 만에 형질전환체의 발현을 확인할 수 있습니다. 적절한 검사 시간은 직접 결정하시기 바랍니다.

4. 안정된 회전 스크리닝(선택 사항)

형질감염 24시간 후, 세포를 신선한 배양 배지(세포를 10배 이상 희석)에 계대 배양하고, 37°C, 5% CO2 배양기에서 하룻밤 배양했습니다. 다음 날, 형질감염 내성 유전자와 일치하는 스크리닝 약물을 첨가했습니다. 약물 내성 클론은 약 1~2주 안에 스크리닝할 수 있습니다. 이 기간 동안 스크리닝 약물이 포함된 배양 배지는 자주 교체해야 합니다.

다양한 세포 배양 용기에 대한 형질 전환 복용량(참조용):

서류:

안전 데이터 시트

40815_MSDS_HB250709_KO.PDF

매뉴얼

40815_매뉴얼_버전 EN20250709.pdf