설명
재조합 단백질 및 플라스미드 DNA 생산 시 대장균(E.coli)을 발현 및 증폭에 사용하는 것은 생물학적 제제를 제조하는 비교적 간단하고 비용 효율적인 방법입니다. 그러나 대장균을 사용하는 공정은 불가피하게 숙주 세포 단백질(HCP) 불순물을 생성하여 제품의 효능을 저하시키고 유해한 독성이나 면역 반응을 유발할 수 있습니다. 따라서 최종 생물학적 제제의 HCP 잔류물 수준을 가능한 한 낮게 유지하는 것이 필수적입니다.
ELISA는 HCP(담당의)를 위한 사용이 간편하고 민감하며 객관적인 검사입니다. 이 키트는 이중 항체 샌드위치 효소면역측정법(샌드위치 ELISA) 원리를 이용하여 샘플 내 플라스미드의 E.coli HCP 잔류물을 검출합니다 . 먼저, 플라스미드용 E.coli HCP 표준물질 ( 36721 - B ) 과 검사 샘플을 항-E.coli HCP 코팅 마이크로타이터 스트립 (36721-A) 에 첨가합니다. 그런 다음 , 희석된 비오틴 표지 항-E.coli HCP 항체 ( 36721-C) 를 첨가 하고 , 마지막으로 스트렙타비 딘-HRP ( 36721-D) 를 첨가하여 항체 + 항원 + 항체-비오틴 + SA-HRP 복합체를 형성합니다. 이어서 TMB 기질 ( 36721-H) 을 첨가합니다 . 복합체 세척 후 발색 반응을 관찰하기 위해 복합체에 i in을 첨가했습니다. TMB는 HRPase에 의해 촉매되는 종결 용액( 36721 - I ) 존재 하에 무색에서 청색으로, 그리고 최종적으로 황색으로 전환되었습니다. 황색 음영은 샘플에서 검출된 대장균 HCP의 양과 양의 상관관계를 보였습니다. 이 키트는 생물학적 제제의 정제 공정 최적화, 중간 공정의 불순물 관리, 그리고 최종 제품의 출하 시험에 사용될 수 있습니다.
이 키트의 검출 범위 는 3.125~200 ng/mL이고, 하한 검출 한계는 0.5 n g/mL입니다.
특징
- 높은 민감도: 진행 중 및 최종 생물학적 샘플에서 최소 0.5 ng/mL의 E.coli HCP (플라스미드) 잔류물을 감지합니다.
- 정확성 보장: E.coli HCP(플라스미드) 잔류물은 75 %-1.25 % 의 회수율로 정확하게 검출될 수 있습니다 .
- 특이성: 다른 외인성 단백질의 간섭 없이 E.coli HCP를 특이적으로 검출합니다 .
- 안정성: 로트 간 차이가 적고, 키트 속성은 7 일 동안 37℃에서 영향을 받지 않습니다.
- 간편한 신호 수집: 바이오틴-스트렙타비딘 시스템을 사용하면 신호를 안정적으로 확대할 수 있습니다.
애플리케이션
- 생물학적 제품의 잔류 E.col i HCP (플라스미드) 검사
사양
|
감광도 |
0.5ng/mL(범위 3.125~200ng/mL) |
|
분석 시간 |
<4시간 |
|
분석 원리 |
2부위 면역효소 검사 |
|
신호 증폭 |
비오틴-스트렙타비딘 시스템 |
|
검출 파장 |
450nm-630nm |
제품 성능
|
제품 성능 검증 프로그램 |
참조 표준 또는 요구 사항 |
예센 |
|
|
1. 키트에 대한 표준 |
수제 표준이 제공됩니다. |
대장균 HCP 동결건조 분말 |
|
|
2. 선형 범위 |
분석 범위 |
실제 상황을 참조하세요 |
3.125~200ng/mL |
|
R2 |
≥0.98 |
≥0.99 이상 |
|
|
각 농도별 검출값 CV |
CV≤15% |
CV≤10% |
|
|
3. 정확성 |
회수율 |
50%~150% |
70%~130% 이상 |
|
4. 정밀도 |
반복성 |
CV≤15% |
< 10% |
|
중간 정밀도 |
CV≤15% |
< 15% |
|
|
5. 독점성 |
다른 출처의 단백질 제품 에 대한 간섭 없음 |
다른 외인성 단백질의 간섭 없이 E.coli HCP 의 특정 검출 |
|
|
6. 민감도 |
정량화 한계 |
목표 물질의 가장 작은 농도의 신뢰할 수 있는 정량화 |
1.5ng/mL |
|
검출 한계 |
실제 상황을 참조하세요 |
0.5ng/mL |
|
|
7. 내구성 |
시약 안정성 |
다양한 보관 온도가 시약 성능에 미치는 영향 평가 |
7일 동안 4°C, 7일 동안 37°C로 유지되었으며, T0와의 차이는 70-130% 범위입니다. |
|
기기 호환성 |
키트는 테스트 결과에 영향을 미치지 않고 다양한 장치에 사용됩니다. |
다양한 유형의 마이크로플레이트 리더(예: 분자 장치 마이크로플레이트 리더)와 호환 가능 |
|
구성 요소
|
구성품 번호 |
이름 |
36721ES48 |
36721ES96 |
|
36721 -A |
항-대장균 코팅 마이크로타이터 스트립 |
48톤 |
96티 |
|
36721 -B |
표준: E.coli HCP(10μg/mL) |
50 μL |
100 μL |
|
36721 -C |
검출 항체: 비오틴 결합 항체(50×) |
150 μL |
300 μL |
|
36721 -D |
스트렙타비딘-HRP(100×) |
150 μL |
300 μL |
|
36721 -E |
희석 완충액 1 |
25mL |
50ml |
|
36721 -F |
세척 완충액 농축액 ( 20× ) |
25mL |
50ml |
|
36721- G |
희석 완충액 2 |
15mL |
30mL |
|
36721 -H |
TMB 기판 |
6mL |
12mL |
|
36721 -I |
해결책 중단 |
5mL |
10mL |
|
36721 -J |
플레이트 실러 |
각각 3개씩 |
각각 5개씩 |
저장
본 제품은 2°C ~8°C에 보관하십시오. 미개봉 제품은 1년간 유효합니다.
* 키트를 수령하시면 모든 구성품이 완벽한지 확인하시고, 즉시 해당 상태로 보관해 주시기 바랍니다.
수치
정밀 디스플레이
에이) 반복성
|
스파이크 샘플 |
분석 내 |
|
|
중복 |
이력서( CV) （ % ） |
|
|
S- 100 ng/mL |
10 |
3.24% |
|
S- 25 ng/mL |
10 |
4.17% |
|
S- 6.25 ng/mL |
10 |
8.26% |
비) 중간 정밀도
표 1. E.coli HCP ELISA의 정확도는 위의 계획에 따라 분석되었습니다.
|
스파이크 샘플 |
Inter-Assay |
|
|
중복 |
이력서( CV) （ % ） |
|
|
S- 100 ng/mL |
30 |
5.32% |
|
S- 25 ng/mL |
30 |
9.16% |
|
S- 6.25 ng/mL |
30 |
13.07% |
10개의 중복된 시료를 표준곡선에서 3가지 농도 로 시험한 결과 , 모든 CV%가 10 % 미만이었다( 표 1 A). E.coli HCP ELISA 키트 3개 로트를 테스트했으며 CV%는 1 5 % 미만이었습니다 ( 표 1B ).
정확도 검증
에이) 희석 선형성
대장균(E.coli) 세포를 이용하여 증폭된 플라스미드 시료(농도 22.6 mg/mL, HCP 농도 55 ng/mL)를 시료 희석액으로 농도구배 희석하여 이 키트를 이용하여 HCP 잔류물 값을 측정하였다. 다음 데이터로부터, 이 키트로 측정한 시료 희석액의 선형성이 우수하고, HCP 분석값과 희석 횟수에 따른 초기 농도의 차이가 적으며, 선형 회수율이 80%~120% 범위에 있고, HCP 검출값이 희석 횟수와 선형 상관관계를 보임을 알 수 있다.
표2 샘플 희석 선형성
|
샘플 이름 |
HCP 농도(ng/mL) |
희석 계수 |
검출 평균(ng/mL) |
실제 HCP 측정(ng/mL) |
회수율(%) |
|
진짜 플라스미드 샘플 |
2 |
22.83 |
45.65 |
83.0% |
|
|
4 |
13.50 |
53.98 |
98.1% |
||
|
8 |
7시 35분 |
58.81 |
106.9% |
비) 스파이킹 회복률
대장균을 사용하여 증폭시킨 플라스미드 샘플(농도 22.6 mg/mL)을 2배로 희석하여 각 농도의 표준균주와 동일한 부피로 혼합하였고, 첨가 회수율은 80%~120% 범위였습니다.
스파이크 회수율(%) = (스파이크된 샘플의 측정값 - 스파이크되지 않은 샘플의 측정값) / 이론값(첨가된 표준물질의 양) x 100%.
표3 샘플 스파이킹 회수율
|
견본 |
검출 평균(ng/mL) |
회수율(%) |
|
에스 |
23.65 |
/ |
|
S + 200 ng/mL（V:V=1:1） |
117.73 |
94.08% |
|
S + 50 ng/mL（V:V=1:1） |
48.17 |
98.08% |
|
S + 12.5 ng/mL（V:V=1:1） |
30.75 |
113.60% |
문서:
결제 및 보안
귀하의 결제 정보는 안전하게 처리됩니다. 당사는 신용카드 정보를 저장하지 않으며 귀하의 신용카드 정보에 접근할 수 없습니다.
문의
당신은 또한 좋아할 수 있습니다
자주 묻는 질문
이 제품은 연구 목적으로만 사용되며 인간이나 동물의 치료 또는 진단용으로 의도되지 않았습니다. 제품과 콘텐츠는
특정 애플리케이션에는 추가적인 제3자 지적 재산권이 필요할 수 있습니다.
예슨은 윤리적 과학에 헌신하며, 우리의 연구가 안전과 윤리적 기준을 보장하는 동시에 중요한 문제를 해결해야 한다고 믿습니다.