설명
피치아 파스토리스 발현 시스템 은 번역 후 처리 과정을 변형한 고효율 진핵생물 발현 시스템으로, 재조합 단백질과 같은 기능성 생물학적 제품의 안정적인 발현에 일반적으로 사용됩니다. 피치아 파스토리스 발현 시스템을 사용하는 제품은 생산 및 정제 과정에서 숙주 세포 단백질(HCP) 불순물이 불가피하게 유입되어 제품의 효능을 저하시키고 유해한 독성이나 면역 반응을 유발할 수 있습니다. 따라서 생물학적 제품의 최종 제품 내 HCP 잔류량을 가능한 한 낮게 유지하는 것이 중요합니다.
ELISA는 의료진을 위한 간편하고 민감하며 객관적인 검사입니다. 이 키트는 이중 항체 샌드위치 효소면역측정법(샌드위치 ELISA) 원리를 이용하여 검체 내 잔류 피치아 파스토리스(Pichia pastoris) HCP를 검출합니다 . 먼저 피치아 파스토리스 HCP 표준물질(36720-B)과 검체를 항피키아 파스토리스 HCP 코팅 마이크로타이터 스트립(36720-A)에 첨가합니다 . 이어서 , 희석 된 비오틴 표지 항피 키아 파스 토리스 HCP 항체 ( 36720-C) 를 첨가 하고 , 마지막으로 스트렙타비딘-H RP (36720-D) 를 첨가하여 항체 + 항원 + 항체-비오틴 + SA-HRP 복합체를 형성합니다. 이어서 TMB 기질 ( 36720-H) 을 첨가합니다 . 복합체 세척 후 발색 반응을 관찰하기 위해 복합체에 i in을 첨가했습니다. TMB는 HRPase에 의해 촉매되는 종결 용액( 36720 - I ) 존재 하에 무색에서 청색으로, 그리고 최종적으로 황색으로 전환되었습니다. 황색 음영은 샘플에서 검출된 Pichia pastoris HCP 의 양과 양의 상관관계를 보였습니다 . 이 키트는 생물학적 제제의 정제 공정 최적화, 중간 공정의 불순물 관리, 그리고 최종 제품의 출시 시험에 사용될 수 있습니다.
이 키트의 검출 범위 는 3.125~200 ng/mL이고, 하한 검출 한계는 0.5 n g/mL입니다.
특징
- 높은 민감도: 처리 중 및 최종 생물학적 샘플에서 최소 0.5 ng/mL의 Pichia pastoris HCP 잔류물을 감지합니다.
- 정확성 보장: Pichia pastoris HCP 잔류물은 75 %-1.25 % 의 회수율로 정확하게 검출될 수 있습니다 .
- 특이성: 다른 외인성 단백질의 간섭 없이 Pichia pastoris HCP를 특이적으로 검출합니다 .
- 안정성: 로트 간 차이가 적고, 키트 속성은 7 일 동안 37℃에서 영향을 받지 않습니다.
- 간편한 신호 수집: 바이오틴-스트렙타비딘 시스템을 사용하면 신호를 안정적으로 확대할 수 있습니다.
애플리케이션
생물학적 제품의 잔류 Pichia pastoris HCP 테스트
사양
|
감광도 |
0.5ng/mL(범위 3.125~200ng/mL) |
|
분석 시간 |
<4시간 |
|
분석 원리 |
2부위 면역효소 검사 |
|
신호 증폭 |
비오틴-스트렙타비딘 시스템 |
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검출 파장 |
450nm-630nm |
제품 성능
|
제품 성능 검증 프로그램 |
참조 표준 또는 요구 사항 |
예센 |
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1. 키트에 대한 표준 |
수제 표준이 제공됩니다. |
피치아 파스토리스 HCP 동결건조 분말 |
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2. 선형 범위 |
분석 범위 |
실제 상황을 참조하세요 |
3.125~200ng/mL |
|
알 2 |
≥0.98 |
≥0.99 이상 |
|
|
각 농도별 검출값 CV |
CV≤15% |
CV≤5% |
|
|
3. 정확성 |
회수율 |
50%~150% |
70%~130% 이상 |
|
4. 정밀도 |
반복성 |
CV≤15% |
< 10% |
|
중간 정밀도 |
CV≤15% |
< 15% |
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5. 독점성 |
다른 출처의 단백질 제품 에 대한 간섭 없음 |
다른 외인성 단백질의 간섭 없이 Pichia pastoris HCP 의 특정 검출 |
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|
6. 민감도 |
정량화 한계 |
목표 물질의 가장 작은 농도의 신뢰할 수 있는 정량화 |
1.5ng/mL |
|
검출 한계 |
실제 상황을 참조하세요 |
0.5ng/mL |
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|
7. 내구성 |
시약 안정성 |
다양한 보관 온도가 시약 성능에 미치는 영향 평가 |
7일간 4°C, 7일간 37°C로 유지, T0 대비 80~120% 범위 내 차이 |
|
기기 호환성 |
키트는 테스트 결과에 영향을 미치지 않고 다양한 장치에 사용됩니다. |
다양한 유형의 마이크로플레이트 리더(예: 분자 장치 마이크로플레이트 리더)와 호환 가능 |
|
구성 요소
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구성품 번호 |
이름 |
36720ES48 |
36720ES96 |
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36720 -A |
항피키아 파스토리스 코팅 마이크로타이터 스트립 |
48톤 |
96티 |
|
36720 -B |
표준: Pichia pastoris HCP(10μg/mL) |
50 μL |
100 μL |
|
36720 -C |
검출 항체: 비오틴 결합 항체(50×) |
150 μL |
300 μL |
|
36720 -D |
스트렙타비딘-HRP(100×) |
75 μL |
150 μL |
|
36720 -E |
희석 완충액 1 |
25mL |
50ml |
|
36720 -F |
세척 완충액 농축액 ( 20× ) |
25mL |
50ml |
|
36720 - 지 |
희석 완충액 2 |
15mL |
30mL |
|
36720 -H |
TMB 기판 |
6mL |
12mL |
|
36720 -I |
해결책 중단 |
5mL |
10mL |
|
36720 -J |
플레이트 실러 |
각각 3개씩 |
각각 5개씩 |
저장
본 제품은 2°C ~8°C에 보관하십시오. 미개봉 제품은 1년간 유효합니다.
* 키트를 수령하시면 모든 구성품이 완벽한지 확인하시고, 즉시 해당 상태로 보관해 주시기 바랍니다.
수치
정밀 디스플레이
에이) 반복성
|
스파이크 샘플 |
분석 내 |
||
|
중복 |
평균 농도(ng/mL) |
이력서 (%) |
|
|
S- 100 ng/mL |
10 |
103.65 |
7.41% |
|
S- 25 ng/mL |
10 |
23.63 |
1.54% |
|
S- 6.25 ng/mL |
10 |
5.71 |
0.19% |
비) 중간 정밀도
표 1. Pichia pastoris HCP ELISA의 정확도는 위의 계획에 따라 분석되었습니다.
|
스파이크 샘플 |
Inter-Assay |
||
|
중복 |
평균 농도(ng/mL) |
이력서 (%) |
|
|
S- 100 ng/mL |
30 |
100.35 |
8.32% |
|
S- 25 ng/mL |
30 |
23.27 |
3.87% |
|
S- 6.25 ng/mL |
30 |
5.43 |
7.65% |
10개의 중복된 시료를 표준곡선에서 3가지 농도 로 시험한 결과 , 모든 CV%가 10 % 미만이었다( 표 1 A). Pichia pastoris HCP ELISA 키트 3개 로트 를 테스트했으며 CV%는 1.5 % 미만이었습니다 ( 표 1B ).
정확도 검증
에이) 희석 선형성
Pichia pastoris 에서 발현된 재조합 단백질을 사용하여 정제한 중간 시료 (시료 단백질 농도 20 mg/mL, HCP 농도 1024 μg/mL)를 희석 다중도 맵핑하여 HCP 잔류물 값이 표준 곡선 범위 내에 있도록 했습니다.다음 데이터로부터 이 키트로 측정한 시료의 희석 선형성이 우수하고, 희석 다중도를 다르게 한 후 HCP 측정값과 이론 농도의 차이가 적었으며, 선형 회수율이 80%~120% 범위에 있었고, HCP 검출 값이 희석 다중도와 선형 상관관계를 보였습니다.
표2 샘플 희석 선형성
|
샘플 이름 |
희석 계수 |
희석된 HCP의 이론값(ng/mL) |
실제 HCP 측정(ng/mL) |
회수율(%) |
|
재조합 단백질 중간체 정제 샘플 |
8000 |
128 |
103.239 |
80.66% |
|
16000 |
64 |
59.414 |
92.83% |
|
|
32000 |
32 |
32.094 |
100.29% |
|
|
64000 |
16 |
17.692 |
110.58% |
|
|
128000 |
8 |
9.491 |
118.64% |
비) 스파이킹 회복률
Pichia pastoris 로 발현된 재조합 단백질을 사용하여 중간 정제 샘플을 32,000배 희석한 후 (샘플 단백질 농도 20 mg/mL, HCP 농도 1024 μg/mL), 샘플에서 Pichia pastoris HCP의 함량은 12.48 ng/mL이었습니다. 이 32,000배 희석된 샘플(S라고 함)을 각 농도의 표준과 동일한 부피로 혼합한 결과, 모든 샘플의 스파이크 회수율이 80%~120% 범위에 있음을 보여주었습니다. 샘플 스파이크 회수율 실험 결과, 모든 스파이크 회수율이 80%~120% 범위에 있음을 보여주었습니다.
스파이크 회수율(%) = (스파이크된 샘플의 측정값 - 스파이크되지 않은 샘플의 측정값) / 이론값(첨가된 표준물질의 양) x 100%.
표3 샘플 스파이킹 회수율
|
견본 |
검출 평균(ng/mL) |
회수율(%) |
|
에스 |
12시 48분 |
/ |
|
S+ 200ng/mL |
94.75 |
82.27% |
|
S+ 100ng/mL |
54.39 |
83.81% |
|
S+ 50ng/mL |
33.43 |
83.82% |
|
S+25ng/mL |
23.15 |
85.39% |
|
S+12.5ng/mL |
17.98 |
88.04% |
|
S+6.25ng/mL |
15.34 |
91.53% |
|
S+3.125 ng/mL |
14.02 |
98.83% |
서류:
안전 데이터 시트
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