일부 단백질과 플라스미드 DNA 생산 시 재조합 발현을 위해 대장균을 사용하는 것은 비교적 간단하고 비용 효율적인 방법입니다. 대장균을 제품 생산에 사용하는 공정은 대장균으로부터 숙주 세포 단백질(HCP)을 오염시킬 가능성이 높으며, 이러한 오염은 치료제의 효능을 감소시키고 바람직하지 않은 독성 반응이나 면역 반응을 유발할 수 있습니다. 따라서 사람이나 동물에게 사용하기 위한 치료제 정제 과정에서 이러한 오염 물질의 수준을 최소화해야 합니다.

ELISA는 HCP를 위한 사용이 간편하고 민감하며 객관적인 검사입니다. 이 키트는 이중 항체 샌드위치 효소면역측정법(샌드위치 ELISA)의 원리를 이용하여 검체 내 잔류 E.coli HCP를 검출합니다 . 먼저, E.coli HCP 표준물질과 검체를 Anti-E.coli HCP 코팅 마이크로타이터 스트립(36712-A)에 첨가 하고 , 희석 된 비오틴 표지 Anti-E.coli HCP 항체 ( 36712-C) 를 첨가한 후 , 마지막으로 스트렙타비딘-H RP (36712-D) 를 첨가하여 항체 + 항원 + 항체-비오틴 + SA-HRP 복합체를 형성합니다. 이어서 TMB 기질 ( 36712-G) 을 첨가합니다 . 복합체 세척 후 발색 반응을 관찰하기 위해 복합체에 투입했습니다 . TMB는 HRPase에 의해 촉매되는 종결 용액(36712-H) 존재 하에 무색에서 청색으로, 그리고 최종적으로 황색으로 전환되었습니다. 황색 음영은 샘플에서 검출된 대장균 HCP의 양과 양의 상관관계를 보였습니다. 이 키트는 생물학적 제제의 정제 공정 최적화, 중간 공정의 불순물 관리, 그리고 최종 제품의 출하 시험에 사용될 수 있습니다.

이 키트의 검출 범위 는 3.125~200 ng/mL이고, 하한 검출 한계는 2.22 n g/mL입니다.

특징

• 높은 민감도: 진행 중 및 최종 생물학적 샘플에서 최소 2.22 ng/mL의 E.coli HCP 잔류물을 감지합니다.
• 정확성 보장: E.coli HCP 잔류물은 75 %-1.25 % 의 회수율로 정확하게 검출될 수 있습니다 .
• 특이성: 다른 외인성 단백질의 간섭 없이 E.coli HCP를 특이적으로 검출합니다 .
• 안정성: 로트 간 차이가 적고, 키트 속성은 7 일 동안 37℃에서 영향을 받지 않습니다.
• 간편한 신호 수집: 바이오틴-스트렙타비딘 시스템을 사용하면 신호를 안정적으로 확대할 수 있습니다.

애플리케이션

• 생물학적 제품의 잔류 대장균 HCP 검사

사양

제품 성능

구성 요소

^* 표준(36712-B)은 동결건조 분말입니다.

저장

본 제품은 2°C ~8°C에 보관하십시오. 미개봉 제품은 1년간 유효합니다.

^* 키트를 수령하시면 모든 구성품이 완벽한지 확인하시고, 즉시 해당 상태로 보관해 주시기 바랍니다.

수치​

특이성 시연

그림 1. E.coli HCP ELISA 키트 의 특이성은 위 그림과 같습니다.

키트 내 항체와의 비특이적 반응을 위해 9개의 샘플을 추출했습니다. 9개 샘플 의 농도는 모두 정량 한계(LOQ)(2.22 ng/mL) 미만이었습니다 .

정밀 디스플레이

에이) 반복성

비) 중간 정밀도

표 1. E.coli HCP ELISA의 정확도는 위의 계획에 따라 분석되었습니다.

8개의 중복된 시료를 표준곡선에서 3가지 농도 로 시험한 결과 , 모든 CV%가 10 % 미만이었다( 표 1 A). E.coli HCP ELISA 키트 3개 로트를 테스트했으며 CV%는 1 5 % 미만이었습니다 ( 표 1B ).

정확도 검증

E.coli HCP 표준의 농도를 높음, 중간, 낮음의 세 가지로 나누고 E.coli에서 발현되는 정제 단백질(잔류물이 없는 여러 HCP) 10μg/mL에 동일한 비율로 첨가한 다음, 높은 농도로 첨가한 샘플은 곱셈 희석으로 만들었습니다.

2배 희석한 샘플, 다양한 농도의 첨가 샘플, 첨가하지 않은 샘플에서 HCP가 검출되었으며, 선형 및 첨가 회수율은 80%~120% 범위에 있었습니다.

스파이크 회수율 = 측정값 / (스파이크 표준 x 50% + 스파이크 표본 값 x 50%)

표 2. 정확도 검증

이중 희석 샘플, 다양한 스파이크 농도를 갖는 샘플 및 스파이크되지 않은 샘플에서 E.coli HCP 의 선형 및 스파이크 회수율은 80%에서 12.5 %까지였습니다( 표 2 ).

서류:

안전 데이터 시트

36712_MSDS_HB20250310_KO.PDF

매뉴얼

36712_매뉴얼_버전 EN20250310.pdf