특징

1. 매우 높은 증폭 특이성 - 이중 밀봉 항체는 중합효소와 엑소뉴클레아제 활성을 동시에 밀봉하여 비특이적 증폭을 효과적으로 피하고 특이성을 향상시킵니다.

2. 뛰어난 검출 감도 - 핫스타트 제형은 낮은 농도의 유전자도 효과적으로 검출하여 더 높은 감도를 제공합니다.

3. 뛰어난 제품 안정성 - 37°C에서 5일 또는 4°C에서 10일 동안 보관해도 성능이 안정적입니다.

4. 기준선 안정성 및 우수한 선형성 - 기준선 드리프트 문제를 해결하여 우수한 선형성을 제공합니다.

5. 효소 활성의 빠른 방출 - 95°C에서 20초간 가열하면 효소 활성의 95% 이상이 방출됩니다.

6. 효소의 폭넓은 적용성 - 야생형과 돌연변이형 Taq 효소 모두에 적합하며, 항체 1mg당 4~10KU의 Taq 효소를 결합시킬 수 있습니다.

1 Taq DNA 중합효소 엑소뉴클레아제 활성 차단

합성 프라이머 프로브를 Taq DNA 중합효소의 반응 혼합물에 각각 첨가하여 이중 폐쇄 항체로 밀봉하거나 개봉한 후 40°C에서 반응을 진행했습니다. 두 반응 모두 형광 신호를 검출하여 이중 폐쇄 항체가 Taq DNA 중합효소의 엑소뉴클레아제 활성을 효과적으로 차단할 수 있음을 확인했습니다.

 그림 1. 이중 밀봉 항체-엔도뉴클레아제 활성의 밀봉 효율 검출.

02 검출감도 검증

각각 Yeasen사의 이중 밀봉 항체와 T사 항체를 사용하여 Taq 효소를 밀봉한 후 ARMS-PCR 기술을 통해 양성 샘플을 검출한 결과, Yeasen사의 이중 밀봉 항체로 밀봉한 Taq 효소가 ARMS-PCR 증폭에서 정확하고 민감도가 더 높은 것으로 나타났습니다.

그림 2. ARMS-PCR의 증폭 곡선.

빨간색: YEASEN 항체+Taq; 파란색: 공급업체 A 항체+Taq.

03 안정성 검증 (4°C에서 10일, 37°C에서 5일).

Taq DNA 중합효소를 각각 차단하는 전통적인 폐쇄 항체와 이중 폐쇄 항체를 사용하여 중합효소를 프라이머와 프로브가 포함된 완전한 프리믹스 용액으로 제조합니다. 이 용액을 4°C에서 10일 동안 또는 37°C에서 1일, 3일, 5일 동안 방치한 후, ASF 플라스미드를 10,000개 복제본으로 증폭합니다. 증폭 곡선과 Ct 값에는 유의미한 변화가 관찰되지 않았습니다.

 그림 3. Taq 중합효소를 전통적인 차단 항체(A)와 이중 차단 항체(B)로 차단한 후 10,000개 사본의 ASF 플라스미드의 증폭 곡선은 qPCR 시스템에 의해 증폭됩니다 . 

04 기준선 감지

특정 프라이머를 특정 완충액 및 기기와 함께 사용하는 특정 조건에서는 기준선 드리프트(baseline drift)라는 현상이 발생할 수 있습니다. 그러나 이중 폐쇄 항체를 사용하면 기준선 드리프트 문제를 효과적으로 해결하여 더욱 안정적인 기준선을 확보할 수 있습니다.

그림 4. qPCR 분석에서 SARS-CoV-2 N 유전자(A)와 ACT 유전자(B)의 증폭 곡선.

05 선형성 검증

이중 폐쇄 항체로 밀봉된 반응 혼합물을 사용하여 ASFV/ACT 이중 플라스미드를 100,000개, 10,000개, 1,000개, 그리고 100개씩 증폭하여 표준 곡선을 작성했습니다. 그림 7에서 볼 수 있듯이, 두 플라스미드 모두 양호한 선형성을 보였습니다.

그림 5. 이중 블록 반응 혼합물을 사용하여 생성된 ASFV 유전자와 ACT 유전자에 대한 표준 곡선 그래프.

06 효소 활성 방출 검정

Yeasen의 이중 폐쇄 항체(Cat#31303)를 사용하여 Taq 효소를 봉합하고 95°C에서 20초간 열충격을 가하여 효소 활성을 측정했습니다. 95°C에서 20초간 열충격을 가한 후, 31303은 효소 활성의 95% 이상을 방출하는 것으로 나타났으며, 이는 T사의 항체와 유사한 수준입니다.

표 1. 효소에 95°C에서 20초간 가한 열충격.

07 멀티플렉스 Taq 중합효소 검출

Yeasen의 이중 폐쇄 항체(Cat#31303)를 사용하여 세 가지 유형의 Taq 중합효소(야생형 + 두 가지 돌연변이형)를 1μg 대 5U의 밀봉 비율로 밀봉하고 형광 값과 밀봉 효율을 측정했습니다. 그 결과, 다양한 유형의 Taq 중합효소에 대해 Yeasen의 이중 폐쇄 항체(Cat#31303)가 우수한 밀봉 효과를 나타냄을 확인했습니다.

표 2. 다양한 유형의 Taq 중합효소의 차단 효율.