재조합 엔테로 키나제 소 엔테로키나제 경쇄의 고순도 재조합 단편으로, 소 엔테로키나제 경쇄와 동일한 아미노산 서열을 가지고 있습니다. 천연 추출 엔테로키나제와 동일한 특정 절단 부위인 Asp-Asp-Asp-Asp-Lys(DDDDK)를 가지고 있습니다. 단백질의 N-말단에 위치한 융합 단백질을 제거하여 원치 않는 융합 태그를 제거함으로써 재조합 융합 단백질의 정확한 N-말단 서열을 확보할 수 있습니다. 동시에 재조합 엔테로 키나제는 천연 효소보다 절단 활성이 높습니다.

재조합 엔테로 키나제 His 태그는 피키아 파스토리스 ( Pichia pastoris ) 분비물에서 발현되는 고순도, 고활성, 고특이성을 가진 소 엔테로키나제입니다. 넓은 pH 범위(4.5-9.5)와 넓은 온도 범위에서 융합 단백질을 효과적으로 절단할 수 있으며, 다양한 세제 및 변성제에서도 부분적인 활성을 유지합니다. 본 제품은 His 태그를 가지고 있어 절단 반응 후 Ni ²⁺ 친화성 컬럼을 통해 쉽게 제거할 수 있어 이후 정제 공정을 크게 간소화합니다.

특징

• 강력한 특이성 - 카르 복실 말단을 절단 하는 특정 프로테아제 앞에 4개의 아스파르트 산을 함유하는 리신 : Asp-Asp-Asp-Asp-Lys .
• 고순도 - 다른 프로테아제 없음 , 비특이적 절단 없음 .
• 동물성 원료 불포함 - 재조합 방식으로 생산되었으며, 외인성 바이러스 오염이 없고, 생산 과정에서 동물성 원료를 사용하지 않습니다.
• 품질 안정성: 일괄 생산으로 안정적이고 연속적인 일괄 생산이 보장됩니다. 제품 일괄 처리 간에 차이가 없으므로 일관된 품질이 보장됩니다.
• 충분한 용량: Yeasen은 5L에서 1500L에 이르는 발효기를 보유하고 있어 다양한 고객의 다양한 단계의 배치 요구 사항을 충족합니다.

응용 프로그램

• 융합 펩타이드와 단백질의 생산 과정에서 단백질의 N-말단에 위치한 융합 단백질을 제거하여 원치 않는 융합 태그를 제거하고, 재조합 융합 단백질의 정확한 N-말단 서열을 보장하는 데 사용됩니다.
• 생물제약 분야에서는 GLP-1 유사 펩타이드 약물의 생산 및 제조가 일반적으로 사용됩니다.

명세서

분자량: *피키아 파스토리스에서 발현 후 글리코실화 효과로 인해 SDS-PAGE에서 나타난 표적 단백질의 분자량은 약 40 kDa입니다.

활성 정의 : *분해 효율은 기질에 따라 달라질 수 있습니다. 일반적으로 단백질 크기가 작을수록 분해 효율이 더 높은 경향이 있습니다. Yeasen이 정의한 효소 활성은 분자량이 약 64.6 kDa인 큰 단백질을 기준으로 합니다. 올리고펩타이드 기질의 경우, 일반적으로 최대 1 유닛으로 500 μg을 분해할 수 있습니다.

구성 요소

저장

본 제품은 -25 ~ -15 ℃ 에서 1년간 보관이 가능합니다 .

수치

1. 엔테로키나제 활성 검사

그림 1. Yeasen enterokinase(Cat#20395ES)의 효소 절단 효과는 공급업체 N*과 일치합니다.

[참고]:기질( Cat# 20391ES) 은 DDDDK(엔테로키나제 인식 및 절단 부위)로 연결된 두 개의 특정 단백질 서열로 구성된 융합 단백질로, 전체 분자량은 약 64.6 kDa입니다. 엔테로키나제에 의해 각각 약 27.9 kDa와 36.6 kDa의 분자량을 갖는 두 개의 독립적인 단백질 단편으로 특이적으로 절단될 수 있습니다. 본 제품은 엔테로키나제 기질로서 재조합 또는 천연 엔테로키나제의 반정량적 또는 정성적 효소 활성 검출에 사용될 수 있습니다.

2. 엔테로키나제 순도 시험

그림 2. 엔테로키나제( Cat# 20395ES) 의 순도는 95% 이상입니다.

[참고]: 엔테로키나제의 이론값은 22.7 kDa입니다. 피치아 파스토리스(Pichia pastoris)에서 발현 후 당화 효과로 인해 SDS-PAGE 분석 결과, 표적 단백질의 분자량은 약 40 kDa로 나타났습니다. 일반적으로 당화된 밴드는 위쪽으로 약간 흐릿한 밴드를 형성합니다(오른쪽 그림 참조). 당사는 고객이 당화를 제거하고 겔을 분석하여 순도를 측정할 수 있도록 탈당화 효소 Endo H(Cat#20414)도 제공합니다(왼쪽 그림 참조).

3. 엔테로키나제 절단 특이성 검사

그림 3. Yeasen enterokinase(20395ES)는 공급업체 N*보다 비특이적 절단이 적습니다.

[참고]: 동일한 조건에서 Yisheng 엔테로키나제(20395ES)와 수입업체 N사의 엔테로키나제를 효소 절단 시험에 사용했습니다. 그 결과, 정제 후 Yeasen 엔테로키나제(20395ES)에서 생성된 비특이적 절단 불순물이 공급업체 N*사의 것보다 현저히 낮았습니다.

4. 엔테로키나제 반복 동결-융해, 가속안정성 시험

그림 4. 예센 엔테로키나제(Cat#20395ES) 반복 동결-해동, 가속 안정성 시험 결과 효소 활성이 크게 변하지 않았음이 나타났습니다.

[참고]: Yeasen 엔테로키나제( Cat# 20395ES) 2개 배치를 무작위로 선택하여 동결-해동을 10회, 20회 반복한 결과 효소 활성은 초기 효소 활성에서 크게 변하지 않았습니다.

25°C에서 7, 16, 32일 동안 보관하고, 37°C에서 7, 14일 동안 보관한 경우 효소 활성은 초기 효소 활성과 크게 변하지 않았습니다.

사용 설명서(응용 프로그램 예제)

1. 반응 시스템:

2. 반응 조건 : 잘 혼합한 후 25°C에서 16시간 동안 반응시킨다.

참고: 재조합 엔테로키나제는 25 mM Tris-HCl pH 8.0으로 희석하여 1 μL당 0.1 U를 함유하는 용액으로 만들 수 있습니다. 사용을 위해.

노트

1. 이 효소 ~이다 고도로 강력함과 그 활동성 ~이다 시퀀스와 관련된 또는 구조 의 단백질 에게 BE 자르다. 그것 ~이다 테스트 중에는 먼저 단백질 투입량의 기울기를 정하고 가장 적절한 양을 사용하는 것이 좋습니다.

2. 다음 조건은 rE K의 활성에 지속적인 영향을 미칠 수 있습니다 .

1) 높은 이온 강도는 rEK의 활성을 저해합니다. 0.25 M NaCl 조건에서는 rEK의 원래 활성을 다음과 같이 감소시킵니다. 약 25%, 2M NaCl 조건에서는 rEK가 거의 완전히 억제됩니다.

2) 활성을 억제하는 시약에는 >2 M Urea, >20 mM b -ME, >0.1% SDS, >50 mM이 포함될 수 있습니다. 이미다졸 등

3) pH<6 또는 pH>9의 조건도 활성을 억제합니다 .

3. 실험실 가운과 장갑과 같은 필요한 PPE를 착용하여 안전을 확보하십시오. 귀하의 건강과 안전을 위해 !

4. 연구를 위해 사용만 가능!

관련 자료:

엔테로키나제의 힘을 풀어내다

서류:

안전 데이터 시트

20395_MSDS_HB250609.pdf

매뉴얼 

20395_매뉴얼 _ 버전 HB250609.pdf