RIPA 용해 완충액(방사성 면역침전 분석 완충액)은 세포와 조직의 신속한 파쇄를 위해 전통적으로 널리 사용되는 용해 용액입니다. 동물 세포의 세포 구성 요소(막, 세포질, 핵 분획 포함)를 효과적으로 용해합니다. 용해 완충액의 강도에 따라 RIPA 완충액은 일반적으로 강, 중, 약으로 분류됩니다.

본 제품은 강력한 RIPA 용해 완충액으로, 오르토바나데이트나트륨, 불화나트륨, EDTA, 류펩틴 등 단백질 분해를 효과적으로 방지하는 여러 억제제를 함유하고 있습니다. 본 용해 완충액을 사용하여 얻은 단백질 시료는 웨스턴 블롯 및 면역침전(IP)과 같은 일반적인 용도에 적합합니다.

저장

젖은 얼음과 함께 배송하십시오. 이 제품은 -20℃에서 보관해야 합니다 . 1 년. 동결-해동을 반복하지 마십시오. 장기 보관 시에는 분주하는 것이 좋습니다.

노트

1. PMSF는 사용자가 제공해야 합니다.

2. 샘플 용해와 관련된 모든 단계는 얼음 위나 4°C에서 수행해야 합니다.

3. 이 RIPA 완충액으로 용해된 시료의 단백질 농도는 BCA 단백질 분석 키트(Cat. No. 20201ES76)를 사용하여 측정할 수 있습니다. 이 완충액에는 세제 농도가 높기 때문에 브래드포드 방법은 이 용해 완충액으로 제조된 시료의 단백질 정량에는 적합하지 않습니다.

4. 안전과 위생을 위해 시약을 다룰 때는 실험실 가운과 일회용 장갑을 착용하세요.

5. 본 제품은 연구용으로만 사용됩니다.

지침

I. 배양 세포 샘플

1. RIPA 용해 완충액을 해동하고 완전히 혼합합니다. 사용 직전에 (몇 분 이내에) 적정량의 용해 완충액에 PMSF를 첨가하여 최종 PMSF 농도가 1 mM이 되도록 합니다.

2. 부착 세포의 경우: 배양 배지를 제거하고 PBS, 생리식염수 또는 무혈청 배지로 세포를 한 번 세척합니다(혈청 단백질이 방해하지 않는 경우 세척은 선택 사항입니다). 6-웰 플레이트의 웰당 150~250 μL의 용해 완충액을 첨가합니다. 용해 완충액과 세포가 완전히 접촉하도록 위아래로 여러 번 피펫팅합니다. 완전히 용해된 후에는 눈에 보이는 세포 펠릿이 남아 있지 않아야 합니다.

현탁 세포의 경우: 원심분리로 세포를 펠릿화한 후, 손가락으로 튜브를 세게 두드려 펠릿을 재현탁합니다. 6-well 세포 당 150~250 μL의 용해 완충액을 첨가합니다. 튜브를 가볍게 두드려 세포가 완전히 용해되도록 합니다. 완전히 용해된 후에는 눈에 보이는 세포 펠릿이 남아 있지 않아야 합니다. 세포 수가 많으면 용해하기 전에 튜브당 0.5~1×10⁶개의 세포가 되도록 샘플을 분주합니다.

3. 완전히 용해된 후, 10,000~14,000g에서 3~5분간 원심분리합니다. 상층액은 PAGE, 웨스턴 블롯, 면역침전 등의 후속 분석을 위해 수집합니다.

용해 완충액 용량에 대한 참고 사항: 일반적으로 6-well 플레이트의 well당 150 μL의 용해 완충액이면 충분합니다. 그러나 세포 밀도가 매우 높은 경우 필요에 따라 용량을 200 μL 또는 250 μL로 늘릴 수 있습니다.

II. 조직 샘플

1. 조직을 작은 조각으로 자릅니다.

2. RIPA Lysis Buffer를 녹여 완전히 섞습니다. 최종 농도가 1 mM이 되도록 사용 직전에 PMSF를 첨가합니다.

3. 조직 20mg당 150~250 μL의 비율로 용해 완충액을 첨가합니다. (용해가 충분하지 않으면 용해 완충액을 추가로 첨가할 수 있습니다. 더 높은 단백질 농도를 원하면 용해 완충액의 양을 적절히 줄이세요.)

4. 유리 균질화기를 사용하여 샘플이 완전히 용해될 때까지 균질화합니다.

5. 완전히 용해된 후, 10,000~14,000g에서 3~5분간 원심분리합니다. 상층액은 PAGE, 웨스턴 블롯, 면역침전 등의 후속 분석을 위해 수집합니다.

6. 조직 샘플이 이미 매우 작은 경우, 작은 조각으로 잘라 용해 완충액을 첨가하고 강하게 볼텍싱하여 직접 용해할 수 있습니다. 완전히 용해한 후 원심분리하여 상층액을 수집하여 후속 실험을 수행합니다. 직접 용해의 장점은 편리하고 균질화기가 필요 없다는 것입니다. 단점은 균질화기를 사용하는 것보다 용해가 덜 완전할 수 있다는 것입니다.

[ 참고 ] : RIPA 완충액을 사용할 때 용해물에서 소량의 투명한 젤 형태의 물질이 종종 관찰됩니다. 이는 정상적인 현상이며 게놈 DNA를 포함하는 복합체로 구성됩니다. 게놈 DNA에 단단히 결합하는 단백질을 분석하지 않는 경우, 후속 분석을 위해 상층액을 원심분리하여 직접 수집할 수 있습니다. DNA에 단단히 결합하는 단백질을 분석하는 경우, 초음파 처리를 통해 젤 형태의 물질을 분해하고 분산시킨 후 원심분리하여 상층액을 수집할 수 있습니다. NF-kappaB 또는 p53과 같은 일반적인 전사 인자를 검출하는 경우, 일반적으로 초음파 처리는 검출 가능한 결과를 얻는 데 필요하지 않습니다.

서류:

안전 데이터 시트

20101_MSDS_HB250820_KO.PDF

매뉴얼

20101_매뉴얼_버전 EN20250820.pdf