이 키트에는 강력한 용해 완충액이 포함되어 있어 샘플(예: 세포, 마우스 꼬리, 마우스 귀, 마우스 발가락, 근육 등)을 빠르게 용해하여 게놈 DNA를 방출할 수 있으며, 용해액은 정제 과정 없이 PCR 반응 시스템에 직접 투입할 수 있어 실험이 편리합니다. 또한, 이 키트는 적은 양의 샘플만 필요하며, 5mg의 마우스 조직 또는 1~5mm의 마우스 꼬리를 실험에 사용할 수 있습니다.

구성 요소

저장

19697-A(용해액)는 다음 장소에 보관해야 합니다. 2~8℃ 1년. 여러 번 사용하시는 경우, 교차 오염을 방지하기 위해 각 포장에 넣어 냉동해 주세요. 19687-B(Stop Solution)는 다음 위치에 보관해야 합니다. -25~-16℃ 1년.

지침

마우스 게놈 DNA 방출

1. 1.5mL 원심분리관*에 동물 조직 5~10mg 또는 쥐 꼬리 1~5mm를 클립으로 고정합니다.
2. 위의 원심분리관에 완충액 ML 90 μL를 넣고, 용해물이 샘플에 완전히 스며들도록 가볍게 흔든 후, 잠깐 원심분리합니다.
3. **온도 조절 인큐베이터**에서 95°C에서 15분간 배양합니다.
4. Buffer MT 10 μL를 첨가하고 가볍게 흔들어 섞은 후 용해를 종료합니다.
5. 선택 단계: 12000rpm에서 2분간 원심분리합니다.
6. 상층액을 새로운 원심분리관으로 옮겨 4°C 또는 -20°C에 보관하거나 상층액을 바로 채취하여 후속 PCR 증폭에 사용합니다.

* 용해 반응이 더 원활하게 진행될 수 있도록 조직을 최대한 잘라야 합니다.

**대부분의 PCR 반응은 일반적으로 95°C에서 15분간 배양하면 충분합니다. 더 많은 양의 DNA가 필요하거나 샘플 용해가 어려운 경우, 배양 시간을 30분까지 연장할 수 있습니다. 조직 블록을 완전히 용해할 필요는 없으며, 잔여물은 후속 원심분리 단계에서 제거할 수 있습니다.

세포 게놈 DNA 방출

형질감염된 세포를 48웰 플레이트에서 3일 동안 배양하여 웰당 약 70,000개의 세포가 되도록 배양한 후, 배지를 최대한 완전히 제거합니다. 그런 다음 웰당 90ul의 ML 완충액을 직접 첨가하고 각 웰을 피펫으로 옮깁니다. 모든 배지를 96웰 PCR 플레이트로 옮깁니다. 95°C에서 5~15분간 PCR 장비를 사용하여 처리하고 식힌 후, 10ul의 MT 완충액을 첨가하고 고르고 완전히 불어줍니다. 고충실도 효소(Cat# 10164) 또는 Taq 효소를 사용하여 PCR 반응 시스템 50ul마다 세포 용해물 0.5~2ul을 첨가하고 PCR을 수행합니다.

그림 1. 19697로 처리한 세포 용해물을 이용한 직접 PCR.

노트

1. 본 제품은 연구용으로만 사용됩니다.
2. 안전을 위해 고글, 실험실 가운, 일회용 장갑을 착용해 주시기 바랍니다.
3. 샘플 간 교차 오염을 방지하기 위해, 각 샘플링 후 샘플링 장치의 가장자리 또는 샘플과 직접 접촉하는 부분을 2% 차아염소산나트륨 용액에 담그고 여러 번 세척한 후 깨끗한 종이 타월로 잔여물을 말린 후 다시 사용해야 합니다. 검사의 편의를 위해, 여러 개의 샘플링 장치를 사용 후 균일하게 준비하고 세척하여 각 샘플이 오염 없는 샘플링 장치로 샘플링되도록 할 수 있습니다.
4. 신선하게 채취한 동물 조직을 사용하는 것이 좋습니다. 장기 동결된 조직의 경우, 반복적인 동결-해동은 최대한 피해야 합니다. 그렇지 않으면 템플릿의 분해로 이어져 PCR 효율에 영향을 미칩니다.

서류:

안전 데이터 시트

19697_MSDS_HB250721.PDF

매뉴얼