AapCas12b 뉴클레아제(C2c1이라고도 함)는 호열성 세균인 Alicyclobacillus acidophilus 에서 유래한 tracrRNA:crRNA(또는 sgRNA)에 의해 매개되는 DNA 엔도뉴클레아제입니다 . 표적 이중가닥 DNA(dsDNA)에 PAM(TTN) 서열이 존재할 경우, 표적 dsDNA를 특이적으로 절단하여 이중가닥 절단을 유발하고 점착성 말단을 생성합니다. AapCas12b는 PAM 서열과 관계없이 단일가닥 DNA 표적을 특이적으로 절단할 수 있습니다. 이중가닥 및 단일가닥 DNA 표적 모두 AapCas12b의 트랜스-절단 활성을 활성화할 수 있습니다. AapCas12b 효소가 sgRNA 및 표적 DNA와 3중 복합체를 형성하면 비특이적 ssDNA 트랜스-절단 활성을 위해 활성화되어 시스템 내 임의의 ssDNA 서열을 절단합니다. AapCas12b의 최적 절단 반응 온도는 60 ^o C 로 , AacCas12b보다 내열성이 뛰어나고 LAMP와 함께 사용하여 등온 증폭/CRISPR-Cas 검출 시스템을 개발하기에 더 적합합니다.

특징

넓은 반응 온도 범위 : 37 ~ 65 ^o C 의 온도 범위 내에서 절단 활성을 나타냄

낮은 뉴클레아제 잔류물 : 잔류 엑소뉴클레아제, 니카아제 또는 RNase 없음

시스 절단 활성 : 시험관 내 이중 가닥 DNA의 매우 효과적인 절단

절단 활성 : 높은 절단 활성으로 핵산 검출에 적합

응용 프로그램

CRISPR/Cas 유전자 편집

CRISPR/Cas 시스템 기반 진단 및 검출

등온 핵산 증폭 기술(RPA 및 LAMP) 등과 결합된 기타 검출 응용 프로그램

명세서

구성 요소

배송 및 보관

본 제품은 -25 ~ -15 ^o C 에서 2년간 보관하시기 바랍니다 .

수치

수치 1. AapCas12b 뉴클레아제의 cis-cleavage 활성 검증

참고: PAM 서열을 갖는 Target dsDNA, sgRNA, Cas12b 및 1 × 반응 완충액을 포함하는 20 μL 반응 시스템에서 혼합물을 60 ^° C 에서 30분 동안 배양한 후 85 ^° C 에서 5분 동안 불활성화했습니다. 아가로스 겔 전기영동 결과, 세 배치의 AapCas12b 뉴클레아제 모두 dsDNA를 효과적으로 절단할 수 있었으며, 절단 효율은 수입 브랜드 T*와 유사했습니다.

그림 2. AapCas12b 뉴클레아 제 절단 활성 시험 결과

참고: PAM 서열을 갖는 Target dsDNA, sgRNA, Cas12b, Report ssDNA 형광 프로브, 그리고 1 × 반응 완충액을 포함하는 20 μL 반응 시스템 에서 , 혼합물을 60 ^° C 에서 1시간 동안 배양하고 30초마다 형광 신호를 수집했습니다. 그 결과, Target DNA, sgRNA, 그리고 Cas12b가 함께 존재할 때 Report ssDNA 형광 프로브가 절단되어 형광 신호를 방출할 수 있음을 확인했습니다.

서류:      

안전 데이터 시트

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매뉴얼

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