LZCap™ AG(3'Acm)는 Cap1 유사체로, "원팟(one-pot)" 공정에서 mRNA를 생산하기 위한 캡핑제로 사용할 수 있습니다. T7 중합효소의 작용 하에, LZCap™ AG(3'Acm), NTP, 그리고 주형 DNA를 이용한 공동 전사를 통해 5' 말단 캡 1 구조를 가진 mRNA가 생성되었습니다. 캡핑된 mRNA는 세포 및 생체 내에서 직접 번역 및 발현될 수 있습니다. LZCap™ AG(3'Acm)는 시험관 내 전사, 유전자 편집, 백신 개발, 종양 CAR-T 치료, 단백질 치환 치료 및 재생 의학 분야에서 널리 사용되고 있습니다.
LZCap™ AG(3'Acm)는 AG를 시작 서열로 하는 T7 프로모터를 필요로 합니다. LZCap™ AG(3'Acm)는 97% 이상의 캡핑된 mRNA를 제공할 수 있으며, 표준 반응당 1μg의 DNA 템플릿으로 최대 100-200μg의 캡핑된 mRNA를 생성할 수 있습니다.

명세서

구성 요소

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수치

LZCap AG(3'Acm) 캡을 사용하면 루시퍼라제 mRNA 캡핑 효율이 약 97.59%이며, T7 RNA 중합효소를 이용한 표준 시험관 내 전사(IVT) 반응에서 1 μg DNA 주형으로 최대 200 μg의 캡핑된 mRNA를 얻을 수 있습니다. 간단한 LiCl 침전 후 mRNA 순도는 최대 99%에 달합니다. 이처럼 높은 캡핑 효율과 수율은 LZCap을 단백질 생산 및 유전자 치료를 포함한 다양한 응용 분야에 매력적인 옵션으로 만들어줍니다.

그림 1. RNAse H 기반 방법을 이용한 LZCapped Luciferase mRNA의 캡핑 효율에 대한 MS 분석. 캡핑 효율은 약 97.59%입니다.

Q1. 디캡핑 효소에 대한 mRNA의 안정성은 어떻습니까?

LZCap AG(3'Acm)와 LZCap AG M6(3'Acm)을 갖는 mRNA는 디캡핑 효소(NEB)에 대해 더 높은 저항성을 보입니다. CapM6(3'-OMe-6mA-7mG) 또한 디캡핑 효소에 저항성을 나타내지만, 일반 Cap AG(3'-OMe-7mG)는 저항성을 나타내지 않습니다.

LZCap의 높은 친화성으로 인해, cap1 아날로그의 낮은 입력은 Hieff™ T7 RNA 중합효소(Cat: 10628)와 함께 사용될 때 완벽한 성능을 보여줍니다.

Q2. LZCap과 eIF4E의 결합 친화도는 어떻습니까?

Q3. LZCap AG(3'Acm) 캡 mRNA의 단백질 발현은 어떻습니까?

LZCap AG(3'Acm) 캡핑 루시퍼라제 mRNA의 발현은 다양한 세포주(3T3-L1, Hela, JAWs, HEK293T 및 Huh7)에서 Cap1 유사체(3'-OMe-7mG) 캡핑 mRNA보다 유의하게 높았습니다. 130회 반복 실험 결과, LZCap AG(3'Acm) 캡핑 루시퍼라제 mRNA의 발현은 (3'-OMe-7mG) 캡핑 mRNA보다 평균 약 1.5배 높았습니다. 마우스에서도 유사한 결과가 관찰되었습니다. 단백질 발현 수준은 mRNA 서열에 따라 약간씩 다를 수 있습니다.

Q4. 동물 관련 데이터가 더 있나요?

LZCap AG(3'Acm) 또는 LZCap AG(3'FMom) 캡의 발현 효율

GLuc를 인코딩하는 mRNA는 Cynomolgus Monkey와 Pig에서 CapAG(3'-OMe-7mG) 캡 mRNA에 비해 더 높은 생체 내 발현을 보입니다.

Q5. LZCap AG 캡핑 mRNA의 선천적 면역원성은 어떻습니까?

LZCapAG(3'Acm) 캡 mRNA는 낮은 선천 면역원성을 보입니다. TLR8, TLR7, IL-1A 및 B는 캡이 없는 RNA에 의해 유도되는 면역 반응에서 중요한 역할을 합니다. LZCap mRNA 면역원성 분석에 대한 생체 내 연구에서 캡이 없는 RNA는 마우스에서 면역 관련 인자의 전사 수준에 유의미한 변화를 유발하는 것으로 나타났습니다. LZCap 및 3'-OMe-7mG 캡 mRNA는 단일 RNA 자극 후 마우스에서 유사하게 낮은 면역 인자 전사 수준을 보였습니다.

Q6. 안전 테스트를 해보셨나요?

네, 세포독성 시험, 인간 중합효소 억제 연구, 에임스 시험을 실시했습니다.

1. 293T, Huh7, MRC5, THP1 및 U87MG 세포에서 3'-Acm-7mG(CC50>10000nM)의 뉴클레오시드 단량체에 대한 세포독성은 관찰되지 않았거나 거의 나타나지 않았습니다.
2. 인간 DNA 중합효소(α,β,γ 및 Klenow)와 미토콘드리아 RNA 중합효소(hPOLRMT) 활동 억제 연구는 3'-Acm-7mG TP가 인간 DNA 또는 RNA 중합효소를 억제하지 않는다는 것을 보여줍니다.
3. 박테리아 역돌연변이 검사(Ames)는 대부분의 설치류와 인간에서 관련 유전자 변형과 유전독성 발암물질을 검출합니다. Ames 검사 결과, 3'-Acm-7mG는 유전독성이 없는 것으로 나타났습니다.

Q7. 이 제품은 특허를 받았나요?

네. 미국에서 특허를 받았습니다.

서류:

안전 데이터 시트

10684_MSDS_HB250708.pdf

매뉴얼

10684_매뉴얼_버전 EN20250613.pdf

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