PCR에 기존의 고충실도 효소를 사용할 경우, 몇 가지 까다로운 문제에 직면하게 됩니다. 예를 들어, 충실도가 충분하지 않아 증폭된 단편을 시퀀싱한 후에도 표적 염기의 돌연변이나 결실이 발생할 수 있습니다. 증폭 시간 또한 비교적 길어서, 5kb 단편을 증폭하는 데 거의 2시간이 걸릴 수 있습니다. 이제 XiaoYi가 여러분의 문제를 해결할 고속 고충실도 PCR을 소개합니다! -- Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (초고속 고충실도 PCR 프리믹스).
2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (염료 첨가) 에는 전기영동 지시약이 미리 첨가되어 있어 PCR 산물을 바로 전기영동에 사용할 수 있습니다. 증폭된 산물은 평활 말단을 가지고 있습니다. 이 고충실도 효소 믹스는 빠르고 간편하며, 민감도가 높고, 특이성이 뛰어나며, 안정성이 우수합니다. 반응 시스템에는 프라이머와 주형만 첨가하면 됩니다. 또한, 이 제품에는 특정 보호제가 함유되어 있어 고충실도 PCR 프리믹스가 반복적인 동결 및 해동 후에도 안정적인 활성을 유지합니다.
제품 특징
- 높은 충실도: 낮은 불일치율, 높은 GC 돌연변이가 발생하기 쉬운 시퀀스에서 염기 불일치 비율이 231/300,000입니다.
- 빠른 증폭 속도: kb당 최대 5초의 빠른 확장 속도
- 폭넓은 적용성: 20-80% GC 함량의 유전자를 다룰 수 있으며, 마우스 용해물과 20% 혈액을 견딥니다.
- 안정성 우수: 제품 성능에 영향을 미치지 않고 37°C에서 7일간 보관 가능
- 빠르고 편리함: 증폭을 위해 프라이머와 템플릿을 추가하기만 하면 되고, 직접 전기영동을 위한 로딩 다이가 함께 제공됩니다.
제품 성능 시연
높은 충실도, 낮은 불일치율
서로 다른 종의 유전체를 주형으로 사용하여, 염기 돌연변이/손실 발생 가능성이 높은 GC-rich 단편 6개를 증폭을 위해 선별했습니다. 각 PCR 산물을 벡터에 클로닝하고, 각 서열에 대해 100개의 단일 클론을 선택하여 염기 불일치/돌연변이 발생 여부를 확인하기 위한 시퀀싱을 수행했습니다. 그 결과, 고속 고충실도 PCR 마스터 믹스(10164ES)가 국내 및 해외 시약보다 염기 불일치/돌연변이 발생률이 더 높았습니다.
확장 시간은 최대 5초 /kb 까지 가능합니다.
고속 고충실도 효소 프리믹스(10164ES)와 Product T를 사용하여, 100 ng의 인간 유전체 DNA 주형으로부터 5초/kb의 신장 속도로 다양한 길이의 단편(0.4~10 kb)을 증폭시켰으며, 이때 필요한 신장 시간은 5초/kb였다. 그 결과, 고속 고충실도 효소 프리믹스(10164ES)는 5초/kb의 신장 속도로 10 kb 이내의 단편을 증폭할 수 있음을 보여주었다.
다양한 GC 함량을 갖는 유전자 단편을 증폭할 수 있습니다.
고속 고충실도 효소 프리믹스(10164ES)를 사용하여 인간 유전체 DNA 주형으로부터 GC 함량이 23~76%인 유전자 단편을 증폭하였으며, 연장 시간은 5초/kb로 설정하였다. 그 결과, 본 제품은 우수한 증폭 특이성을 보였으며, 다양한 GC 함량의 단편도 증폭할 수 있음을 확인하였다.
다양한 GC 함량을 갖는 유전자 단편을 증폭할 수 있음
고속 고충실도 효소 프리믹스(10164ES)를 사용하여 다양한 샘플에서 다양한 길이의 단편을 증폭하였으며, 연장 시간은 킬로베이스당 5~10초로 설정했습니다. 결과는 이 제품이 탁월한 증폭 특이성을 나타내며 다양한 템플릿에서 추출한 다양한 단편의 증폭에 적합함을 보여줍니다.
참고: 1. 마우스 게놈 DNA 1kb; 2. 마우스 게놈 DNA 2kb; 3. 마우스 게놈 DNA 6kb; 4. 옥수수 게놈 DNA 1kb; 5. 벼 게놈 DNA 2kb-A; 6. 벼 게놈 DNA 2kb-B; 7. 인간 293세포 cDNA 1kb; 8. 인간 293세포 cDNA 2kb; 9. 인간 293세포 cDNA 3kb; 10. 인간 293세포 cDNA 12kb; 11. 대장균 배지 8kb; 12. 대장균 배지 16kb; 13. 벼 게놈 DNA 10kb-A; 14. 벼 게놈 DNA 10kb-B; 15. 벼 게놈 DNA 10kb-C; 16. 벼 유전체 DNA 20 kb-A; 17. 벼 유전체 DNA 20 kb-B; 18. 인간 혈액 직접 증폭 3 kb.
다양한 종에 걸친 템플릿 증폭의 높은 검출률
고속 고충실도 효소 프리믹스(10164ES)를 사용하여 아라비돕시스, 유채, 감자에서 0.5~10kb 범위의 다양한 GC 함량 단편을 5초/kb의 연장 시간으로 증폭시켰다. 그 결과, 고속 고충실도 효소 프리믹스(10164ES)가 성공적인 증폭을 보장할 수 있음을 보여주었다.
고속 고충실도 효소 프리믹스(10164ES)를 사용하여, 애기장대, 유채, 초파리, 예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans), 제브라피시에서 무작위로 선택된 단편(0.5~10 kb 크기, GC 함량 20~80% 포함)을 증폭시켰다. 연장 시간은 5초/kb로 설정하였다. 그 결과, 고속 고충실도 효소 프리믹스(10164ES)의 검출률이 높음을 확인하였다.
안정성이 좋다
37°C에서 각각 3일과 7일 동안 가열 가속 보관된 고속 고충실도 효소 프리믹스(10164ES)를 사용하여 100 ng의 인간 유전체 DNA로부터 3 kb와 5 kb의 DNA 단편을 증폭시켰으며, 증폭 시간은 5초/kb로 설정하였다. 그 결과, 생성물의 안정성이 우수함을 확인하였다.
고객 피드백
동물 gDNA-120bp-50%GC
고객 평가: PCR 과정이 빠르고, 밴드가 적절하며, 아가로스 겔 전기영동에 바로 로딩할 수 있습니다. N 브랜드의 밴드는 위쪽으로 치우쳐 있는데, 이는 자체 완충액의 영향일 수 있으며, 로딩 완충액을 첨가하지 않았기 때문에 현재 실험 프로토콜에서 사용하는 고성능 효소를 이 제품으로 대체할 수 있습니다.
식물 cDNA-729bp-45.13%GC
고객 평가: T 브랜드에 비해 클로닝 밴드가 더 선명하고 균일하며, 전체 PCR 과정이 더 빠릅니다. 겔을 사용할 때 염료를 추가할 필요가 없어 매우 편리하고 시간도 절약됩니다.
미생물 gDNA-1158、1953bp-58.8%、52.9%GC
고객평가: V브랜드와 비교해도 효과는 비슷하지만, 개인적으로는 더 좋다고 생각합니다.
식물 cDNA-2000bp-40%GC
고객 평가: 효과가 아주 좋고, 스트립이 깨끗합니다.
고충실도 PCR 선택 가이드
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제품 포지셔닝 |
제품명 |
고양이# |
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5s/kb, 충실도와 속도 보장(염료 포함) |
10164ES |
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83×Taq, 높은 검출률(염료 포함) |
10154ES |
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83×Taq 단일 효소 + 완충액 분리 |
10153ES |
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1–7 단편 1단계 클로닝 |
10923ES |