일차 골수유래 대식세포(BMDM) 형질감염 프로토콜

1. 실험 재료

  • BMDM 세포
  • 표적 플라스미드 DNA(농도 ≥ 1000ng/μL )
  • Hieff Trans TM Booster DNA&RNA Transfection Reagent (Cat# 40801 ) ( 자세한 정보를 알아보고 무료 샘플을 받으세요 )
  • Opti-MEM 환원 혈청 배지
  • 호환 조직 배양 플레이트 및 관련 실험실 소모품(예시로 24웰 플레이트 사용)

2. 실험 절차

1) 형질감염 1일 전 준비

세포를 세고 성장 속도 에 따라 분주하여 다음 날 형질 전환 시 세포 밀도가 약 80%~90%에 도달하도록 합니다.

2) 형질전환 당일 전처리(선택 사항)

세포 배양 배지를 흡인하고 0.5mL의 신선한 완전 배지로 교체합니다 .

3) DNA-Transfection Reagent 복합체의 제조

  • DNA 희석: 각 웰에서 0.5μg DNA를 취해 25μL Opti-MEM 환원 혈청 배지와 1μL Transfection Enhancer 에 첨가합니다 .
  • 희석된 형질감염 시약: 형질 감염 시약 1 μL를 취해 Opti-MEM 환원 혈청 배지 25 μL에 첨가합니다.
  • DNA-Transfection Reagent 복합체 형성: 희석된 DNA(26 μL)와 희석된 Transfection Reagent(26 μL)를 혼합합니다. 실온에서 10~15분간 반응시킵니다.

4) 세포 형질감염

DNA-트랜스펙션 시약 복합체를 세포에 한 방울씩 떨어뜨립니다. 접시를 앞뒤로 부드럽게 흔들어 골고루 분산되도록 합니다.

5) 트랜스펙션 후 처리

복합체를 제거하지 마십시오. 37°C CO₂ 배양기에서 18~24시간 동안 계속 배양하십시오. 그 후 표적 유전자 발현을 검출하십시오.

3. 실험 결과

그림 1. Booster DNA&RNA Transfection Reagent를 사용하여 일차 골수 유래 대식세포(BMDM)에 플라스미드 DNA를 형질감염시킨 결과, 경쟁사 L*3000 대비 Booster의 일차 세포 형질감염 효율이 우수함을 보여줍니다.

 그림 1. Booster DNA&RNA Transfection Reagent를 사용한 일차 골수 유래 대식세포(BMDM)에서의 플라스미드 DNA 형질감염 과 경쟁사 L *3000 의 형질감염 비교 . 이 결과 는 Booster 의 일차 세포 형질 감염 효율이 우수함을 보여줍니다 .

4. 고객 피드백

1) 고효율 1차 피부 섬유아세포 형질감염

그림 6. Booster DNA&RNA Transfection Reagent를 사용한 일차 피부 섬유아세포에서의 플라스미드 EGFR DNA 형질감염과 L*3000의 비교. 이 결과는 Booster의 일차 세포 형질감염 효율이 우수함을 보여줍니다.

 그림 2. Booster DNA&RNA Transfection Reagent를 사용한 일차 진피 섬유아세포 에서의 플라스미드 EGFR DNA 형질감염 과 L * 3000을 비교한 결과 . 이 결과는 Booster 의 일차 세포 형질감염 효율이 우수함을 보여줍니다 .

2) 고효율 돼지 폐포 대식세포 형질감염

그림 6. Booster DNA&RNA Transfection Reagent를 사용한 돼지 폐포 대식세포(PAM) 일차 세포에서의 DNA transfection 결과, 경쟁사 L*3000 대비 Booster의 일차 세포 transfection 효율이 우수함을 보여줍니다.

그림 3. Booster DNA&RNA Transfection Reagent를 L * 3000 과 비교 하여 돼지 폐포 대식세포(PAM) 일차 세포에 DNA transfection한 결과 . 이 결과 는 Booster 의 일차 세포 transfection 효율이 우수함을 보여줍니다 .

3) 고효율 1차 마우스 간세포 형질 감염

그림 4. Booster DNA&RNA Transfection Reagent를 사용한 마우스 일차 간세포 플라스미드 DNA 형질감염과 T 브랜드 L*3000을 비교한 결과. 이 결과는 Booster의 일차 세포 형질감염 효율이 우수함을 보여줍니다.

4) 고효율 1차 마우스 신경줄기세포 형질 전환

그림 3. Booster DNA&RNA Transfection Reagent를 S 브랜드 S*8008과 비교했을 때, 마우스 일차 신경줄기세포에 mRNA를 형질감염시킨 결과입니다. 이 결과는 Booster가 일차세포 형질감염 효율이 우수함을 보여줍니다.

그림 5. Booster DNA&RNA Transfection Reagent를 사용한 마우스 일차 신경줄기세포 mRNA 형질전환과 S 브랜드 S*8008의 형질전환 비교. 이 결과는 Booster가 일차세포 형질전환 효율이 우수함을 보여줍니다.

5. 자주 묻는 질문(FAQ) 및 솔루션

1) 형질전환 효율을 개선하는 방법은?

  • 핵산 벡터 구조를 최적화합니다(프로모터 선택, 벡터 백본 최적화).
  • 1차 세포에 대해 검증된 형질전환 시약을 선택하세요.

Hieff Trans TM 부스터 DNA&RNA 트랜스펙션 시약 ( Cat#40801 ) 다음과 같은 특징이 있으며 무료 샘플을 지원합니다.

  • 낮은 세포독성: 새로운 폴리머는 기존 리포좀을 대체하여 세포독성을 줄이고 세포 생존력을 향상시킵니다.
  • 빠른 방출 및 더 높은 효율성: 빠른 방출은 세포 내 핵산 분해를 최소화하여 90% 이상의 형질 전환 효율을 달성합니다(유세포 분석기로 측정).
  • 형질전환이 어려운 세포주를 위한 프리미엄 옵션: 민감 세포와 일차 세포.
  • 입증된 성능, 광범위한 세포주 적용 범위: 높은 효율성 달성 293T, HeLa, MCF7, HepG2, A549, NIH3T3, RAW264.7, HCT116 등 200개 이상의 다양한 세포주와 일차 세포를 통해 일관되고 재현 가능한 결과를 얻었습니다.
  • 하나의 시약, 모든 핵산: 최대 15kb 단편까지도 높은 효율로 DNA, siRNA, miRNA, mRNA 및 ASO를 전달합니다.

2) 형질전환 결과가 비정상이면 어떻게 해야 하나요?

내부 참조 대조군을 설정합니다(예: 체계적 오류를 배제하기 위해 구성적으로 발현되는 플라스미드를 사용합니다).

세포 생존력을 감지합니다(Calcein-AM/PI 이중 염색을 사용하여 사망률 <20% 확인).

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애플리케이션

이름

카탈로그 번호

크기

DNA, siRNA, miRNA, mRNA, ASO 등과 호환됩니다.

일차세포에서 의 성공이 입증되었습니다 .

Hieff Trans TM 부스터 DNA&RNA 트랜스펙션 시약

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