説明
レンチウイルス物理力価qPCR検出キットは、HIV-1由来レンチウイルスベクターのゲノム中の保存領域（LTR）をターゲットとして、レンチウイルスの物理力価（ウイルス粒子の総数）を定量的に検出するために設計されたキットです。
本キットは、プローブ法による蛍光定量PCRの原理を採用し、レンチウイルスRNAを迅速かつ特異的に検出します。最も広い直線範囲は5コピー/μL～5×10コピー/μLで、検出限界は0.5コピー/μLと極めて低くなっています。また、レンチウイルスRNAコントロール（ RNA定量参照製品）が含まれています。本キットは、残留DNAサンプル調製キット（カタログ番号18461ES）および組換えDNase I（RNaseフリー）（カタログ番号10325ES）と併用する必要があります。
特徴
- 規制への準拠:製品は Chp、USP、ICH などの要件に従って完全に検証されており、その性能は中国および海外の規制と標準に準拠しています。
- 品質保証：キットの原材料はすべて自社開発しており、qPCR ミックスおよびその他の酵素製品は超クリーンな酵素工場で生産されています。
- 高感度：定量下限値（LLOQ）は5コピー/uL でした。
- 高精度:バッチ内再現性が高く CV <10%、バッチ間変動が小さい、つまり中程度の精度 CV <15%。
- 強力な特異性:他の外因性ゲノム DNA からの干渉なしにレンチウイルス RNAを特異的に検出します。
- 強力な耐干渉性：内部品質管理（IC）を導入することで、サンプルの干渉、異常な反応準備などの要因を排除し、偽陰性を効果的に回避できます。
応用
- 生物学的製品中の残留レンチウイルスRNA検査。
仕様
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感度 |
5コピー/μL （範囲5 ～ 5×108コピー/μL ） |
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分析時間 |
約1.5時間 |
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アッセイ原理 |
蛍光プローブqPCR法 |
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必要な楽器 |
リアルタイム蛍光定量PCRシステム |
製品パフォーマンス
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製品性能検証プログラム |
参照標準または要件 |
イェーセン |
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1.キットの基準 |
自家製の標準が利用可能 |
HIV-1由来レンチウイルスベクターのゲノム中の保存領域（LTR）を含むプラスミドRNA |
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2.線形範囲 |
アッセイ範囲 |
実際の状況を参照する |
5～5x108コピー/μL |
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R2 |
≥0.98 |
≥0.99以上 |
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スロープ |
-3.1～-3.8 |
-3.1～-3.6 |
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増幅効率 |
84%～109% |
90%～109% |
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3. 正確性 |
回復率 |
50%～150% |
70%～130%以上 |
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4. 精度 |
再現性 |
CV≤15% |
10%未満 |
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中精度 |
CV≤15% |
15%未満 |
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5. 独占性 |
他のソースからのRNAへの干渉なし |
他の外因性RNAの干渉を受けずにレンチウイルスRNAを特異的に検出 |
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6. 感受性 |
定量限界 |
対象物質の最小濃度を確実に定量 |
5コピー/μL |
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検出限界 |
実際の状況を参照する |
0.5コピー/μL |
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7. 耐久性 |
試薬の安定性 |
異なる保管温度が試薬の性能に及ぼす影響を評価する |
37℃で7日間保存し、凍結融解を10回繰り返した後、キットの増幅効率は90%～109%、R2≥0.99以上である。 |
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機器の互換性 |
キットはテスト結果に影響を与えることなく、さまざまなデバイスで使用できます。 |
多くの種類の qPCR 機器と互換性があります (例: Bio-Rad CFX96 光学モジュール、Thermo Scientific ABI 7500、ABI Quant Studio 5) |
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コンポーネント
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コンポーネント番号 |
名前 |
41333ES50 |
41333ES60 |
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41333-A |
レンチウイルスqPCRミックス |
0.75 mL |
1.5mL |
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41333-B |
ワンステップ酵素ミックス |
200μL |
400μL |
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41333-C |
RNA希釈バッファー |
1.8mL×2 |
1.8mL×4 |
|
41333-D |
レンチウイルスRNAコントロール（5×108 コピー数/μL ） |
25μL |
50μL |
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41333-E |
IC * |
50μL |
100μL |
* IC ：内部統制。
ストレージ
この製品は-25～-15℃で1年間保管してください。
その 41333 -Aは光から保護して保管してください。
数字
- 定量限界
レンチウイルスRNA濃度10コピー/μL、 5コピー/μL レンチウイルスRNAは、濃度ごとに10回繰り返し測定を行い、それぞれ2コピー/μLおよび2コピー/μLの濃度で検出されました。その結果、レンチウイルスRNAのCVは5コピー/μL以上の濃度で20%未満でした。したがって、レンチウイルスRNA検出キットにおけるレンチウイルスRNAの定量限界は5コピー/μLでした。
表1レンチウイルスRNAの定量限界（LOQ）アッセイ結果
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繰り返し回数
テスト項目 |
レンチウイルスRNA（コピー/μL） |
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量 |
返品率 |
|
|
1 |
5.43 |
108.60% |
|
2 |
5.7 |
114.00% |
|
3 |
4.93 |
98.60% |
|
4 |
5.72 |
114.40% |
|
5 |
4.76 |
95.20% |
|
6 |
5.53 |
110.60% |
|
7 |
6.53 |
130.60% |
|
8 |
4.95 |
99.00% |
|
9 |
4.84 |
96.80% |
|
10 |
5.67 |
113.40% |
|
平均値 |
5.41 |
\ |
|
履歴書 |
13.49% |
\ |
図1. 5コピー/μLレンチウイルスRNA qPCRアッセイ結果
- 検出限界
定量限界以下の様々な濃度におけるレンチウイルスRNAの検出とブランク限界の要件を組み合わせることで、本試薬キットの検出限界が得られます。結果によると、 0.5コピー/μL以上の濃度において、20回の繰り返し試験で19ウェル以上が検出されました（つまり、検出率は95%以上です）。したがって、レンチウイルス物理力価qPCR検出キットの検出限界は0.5コピー/μLに達する可能性があります。
表2. レンチウイルスRNAの検出限界（LOD）アッセイ結果
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Ct値 理論濃度 |
レンチウイルスRNA （コピー/μL） |
||
|
1 |
0.5 |
0.2 |
|
|
陽性数 / 合計数 |
20/20 |
20/20 |
18/20 |
|
検出率 |
100% |
100% |
90% |
文書:
安全データシート
マニュアル
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