説明
複製能のある AAV 血清型 2 (rcAAV2) 検出キットは、AAV2 血清型の組み換えアデノ随伴ウイルスベクターを使用して、さまざまな遺伝子治療、腫瘍学、ワクチン開発製品における複製能のあるアデノ随伴ウイルス (rcAAV) の潜在的なリスクを定量的に分析および検出するように設計されています。
このキットは蛍光プローブ定量PCRの原理に基づいており、rAAV末端を検出するためにqPCRを使用しています。
rAAVとrcAAVのそれぞれに対応するITR（反復配列）（すなわち参照遺伝子）と、rcAAVの連結配列（すなわち標的遺伝子）をそれぞれ検出することで、rAAVとrcAAVの同時定量検出を実現します。キットには、参照遺伝子と標的遺伝子のDNA定量リファレンス（rcAAV2 Reference&Target DNA Control）も含まれています。
このキットを使用する前に、テストするサンプルが以下の条件も満たしていることを確認してください。
1. 検査対象となるサンプル中のアデノ随伴ウイルスの血清型は AAV2 です。
2. 検査対象サンプル中の組み換えアデノ随伴ウイルスベクター rAAV の ITR 配列は、以下に示すように rAAV2 の ITR 配列と一致する必要があります。
>rAAV-2/N ITR 順序：
TTGGCCACTCCCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCT
特徴
- 規制への準拠:製品は Chp、USP、ICH などの要件に従って完全に検証されており、その性能は中国および海外の規制と標準に準拠しています。
- 品質保証：キットの原材料はすべて自社開発しており、qPCR ミックスおよびその他の酵素製品は超クリーンな酵素工場で生産されています。
- 高感度：定量下限値（LLOQ）は2コピー/uL でした。
- 高精度:バッチ内再現性が高く CV <10%、バッチ間変動が小さい、つまり中程度の精度 CV <15%。
- 強力な特異性:他の外因性ゲノム DNA からの干渉なしにrcAAV2 残留 DNAを特異的に検出します。
- 強力な耐干渉性：内部品質管理（参照）を導入することで、サンプルの干渉、異常な反応準備などの要因を排除し、偽陰性を効果的に回避できます。
応用
- 生物学的製剤中の残留rcAAV2 DNA検査。
仕様
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感度 |
2 コピー/μL （範囲：参照および標的はいずれも 2×101 ～ 2×106 コピー/μL ） |
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分析時間 |
約1.5時間 |
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アッセイ原理 |
蛍光プローブqPCR法 |
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必要な楽器 |
リアルタイム蛍光定量PCRシステム |
製品パフォーマンス
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製品性能検証プログラム |
参照標準または要件 |
イェーセン |
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1.キットの基準 |
自家製の標準が利用可能 |
参照遺伝子と標的遺伝子を含むプラスミドDNA |
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2.線形範囲 |
アッセイ範囲 |
実際の状況を参照する |
2x101～2x106コピー/μL |
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R2 |
≥0.98 |
≥0.99以上 |
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スロープ |
-3.1～-3.8 |
-3.1～-3.6 |
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増幅効率 |
84%～109% |
90%～109% |
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3. 正確性 |
回復率 |
50%～150% |
70%～130%以上 |
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4. 精度 |
再現性 |
CV≤15% |
10%未満 |
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中精度 |
CV≤15% |
15%未満 |
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5. 独占性 |
他のソースからのDNAへの干渉なし |
他の外因性DNAの干渉なしにrcAAV2 DNAを特異的に検出 |
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6. 感受性 |
定量限界 |
対象物質の最小濃度を確実に定量 |
2コピー/μL |
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検出限界 |
実際の状況を参照する |
0.125コピー/μL |
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7. 耐久性 |
試薬の安定性 |
異なる保管温度が試薬の性能に及ぼす影響を評価する |
2～8℃で30日間、37℃で14日間、凍結融解を10回繰り返した場合、キットの増幅効率は90％～109％、R2≥0.99以上です。 |
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機器の互換性 |
キットはテスト結果に影響を与えることなく、さまざまなデバイスで使用できます。 |
多くの種類の qPCR 機器と互換性があります (例: Bio-Rad CFX96 光学モジュール、Thermo Scientific ABI 7500、ABI Quant Studio 5) |
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コンポーネント
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コンポーネント番号 |
名前 |
41327ES50 |
41327ES60 |
|
41327-A |
rcAAV2 qPCRミックス |
300μL×2 |
600μL×2 |
|
41327-B1 |
rcAAV2 リファレンスプライマー＆プローブミックス |
200μL |
400μL |
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41327-B2 |
rcAAV2 ターゲットプライマー＆プローブミックス |
200μL |
400μL |
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41327-C |
DNA希釈バッファー |
1.8mL×2 |
1.8mL×4 |
|
41327-D |
rcAAV2リファレンス&ターゲットDNAコントロール（2×108 コピー数/μL ） |
50μL |
100μL |
ストレージ
この製品は-25～-15℃で2年間保管してください。
41327 -A 、41327-B1、41327 -B 2はいずれも光から保護して保管する必要があります。
数字
- 定量限界
rcAAV2 DNA濃度2 ×101 ターゲットDNAおよびリファレンスDNAを用いて、それぞれ10コピー/μL、 10コピー/μL、 5コピー/μL 、2コピー/μL 、 1コピー/μLの濃度で、各濃度で10回の反復試験を実施しました。その結果、 rcAAV2 DNAのCVは2コピー/μL以上の濃度で20%未満でした。したがって、 rcAAV2 DNA残留検出キットの定量限界は2コピー/μLでした。
表1 rcAAV2 DNAの定量限界（LOQ）アッセイ結果
|
繰り返し回数
テスト項目 |
ターゲット（コピー/μL） |
参照（コピー/μL） |
||
|
量 |
返品率 |
量 |
返品率 |
|
|
1 |
2.34 |
117.01% |
1.97 |
98.63% |
|
2 |
2.13 |
106.26% |
1.92 |
96.22% |
|
3 |
2.06 |
103.24% |
2.45 |
122.39% |
|
4 |
1.99 |
99.43% |
2.15 |
107.52% |
|
5 |
1.93 |
96.26% |
1.78 |
89.14% |
|
6 |
1.93 |
96.56% |
2.35 |
117.72% |
|
7 |
2.27 |
113.69% |
1.80 |
90.16% |
|
8 |
2.38 |
119.10% |
1.65 |
82.39% |
|
9 |
2.41 |
120.73% |
1.88 |
94.25% |
|
10 |
1.85 |
92.43% |
1.83 |
91.40% |
|
平均値 |
2.13 |
\ |
1.98 |
\ |
|
履歴書 |
9.83% |
\ |
13.87% |
\ |
図1 . 2コピー/μL rcAAV2 DNA qPCRアッセイの結果
- 検出限界
定量限界以下の様々な濃度におけるターゲットおよびリファレンスの検出とブランク限界の要件を組み合わせることで、本試薬キットの検出限界が得られます。結果によると、濃度0.125コピー/μL以上では、20回の繰り返し試験で19ウェル以上が検出されました（つまり、検出率は95%以上です）。したがって、本複製アデノ随伴ウイルス血清型2（rcAAV2）検出試薬キットの検出限界は0.125コピー/μLに達する可能性があります。
表2. rcAAV2 DNAの検出限界（LOD）アッセイ結果
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Ct値 理論濃度 |
ターゲット（コピー/μL） |
参照（コピー/μL） |
||||
|
0.25 |
0.125 |
0.0625 |
0.25 |
0.125 |
0.0625 |
|
|
陽性数 / 合計数 |
20/20 |
19/20 |
18/20 |
20/20 |
19/20 |
19/20 |
|
検出率 |
100% |
95% |
90% |
100% |
95% |
95% |
文書:
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