バイオ医薬品の製造には、細胞培養や組織培養がしばしば用いられます。これらの培養では、細胞の成長に必須の栄養素を供給するためにウシ胎児血清が広く用いられており、ウシ胎児血清には一定量のBSA（ウシ血清アルブミン）が含まれています。ワクチン、抗体医薬品、組織工学製品、細胞・造血幹細胞移植（GCT）などのバイオ医薬品の製造においては、製造される医薬品の安全性を考慮し、血清含有培地に代わり、血清に起因するウイルス汚染などの潜在的な危険性を最小限に抑える無血清培地が徐々に導入されています。中でも無血清培地は、主にウシ血清アルブミン（BSA）、トランスフェリン、インスリンなど、血清の機能を代替できる様々な生体分子を配合しています。そのため、血清含有培地と無血清培地の両方にBSAが存在し、精製などの製造工程で不純物タンパク質の大部分は除去されますが、最終的なバイオ製品には微量の外因性タンパク質（例：BSAなど）が依然として含まれています。

BSAは外因性タンパク質であるため、人体に入ると重篤なアレルギー反応を引き起こす可能性があり、生物製剤の安全性に影響を及ぼす可能性があります。2020年版の中国薬局方（第三部）では、さまざまなワクチン中のBSAの残留量が規定されており、基本的には50 ng/mL以下、または50 ng/投与量以下となっています。

ELISAは、BSA残留物を検出するための使いやすく、感度が高く、客観的な方法です。このキットは、二重抗体サンドイッチ酵素結合免疫吸着検定法（サンドイッチELISA）の原理を使用して、サンプル内の残留BSAを検出します。まず、 BSA標準（ 36722-B ）と試験サンプルを抗BSAコーティングされたマイクロタイターストリップ（36722-A）に加え、次に希釈したHRP標識BSA検出抗体（36722-C）を加えて、抗体+抗原+抗体-HRP複合体を形成します。HRP複合体を形成したら、プレートを洗浄し、TMB発色ミックス（36722-E + 36722-F）を加えて発色させます。TMBはHRP酵素によって触媒され、停止溶液（36722-G）の作用下で無色から青、そして最終的に黄色に変化します。黄色の色合いは、サンプルで検出されたBSAの量と正の相関関係にあります。このキットは、生物製剤の精製プロセスの最適化、中間プロセスにおける不純物管理、最終製品のリリーステストに使用できます。

このキットの検出範囲は1.5625 ng/mL～50 ng/mL 、検出下限値は≤1ng/mLです。

特徴

l  高感度:製造過程および最終的な生物学的サンプル中の1 ng/mLという微量のBSA残留物を検出します。

l  精度を保証: BSA残留物は75 % ～ 125 %の回収率で正確に検出できます。

l   特異性:他の外因性タンパク質からの干渉を受けずにBSAを特異的に検出します。

l  安定性:ロット間の差は小さく、37℃以下で7日間使用してもキットの特性に影響はありません。

l  簡単なシグナル収集： HRP-ビオチンシステムを使用すると、シグナルを安定的に拡大できます。

応用

l  生物学的製剤中の残留BSA試験

仕様

製品パフォーマンス

コンポーネント

ストレージ

本製品は2℃～8℃で保管してください。未開封の場合は1年間有効です。

*キットを受け取ったら、すべてのコンポーネントが揃っているかどうかを確認し、対応する状態ですぐに保管してください。

数字

高精度ディスプレイ

A)再現性

B)中精度

表1. BSA ELISAの精度は上記のスキームに従って評価された。

標準曲線上の 3 つの濃度で 10 個の重複試験を実施したところ、すべての CV% が 10% 未満でした (表 1A)。3 ロットの BSA ELISA キットをテストしたところ、CV% は 10% 未満でした (表 1B)。

精度検証

顧客から提供された 4 つのサンプルの BSA 残留物の初期テストの後、BSA 含有量が標準曲線の範囲内であることが測定され、その後、サンプル添加回収テストが実行されました。

試験対象となる4つのサンプル（以下、TSと表記）に、10ng/mLのBSA標準液を中濃度で添加し、サンプル添加回収試験を実施しました。その結果、添加回収率はいずれも80%から120%の範囲でした。

添加回収率 % = (添加サンプルの測定値 - 添加していないサンプルの測定値)/理論値 (添加標準物質の量) * 100%。

表2精度検証

文書:

安全データシート

36722_MSDS_HB250310.pdf

マニュアル 

36722_マニュアル_Ver.EN20250310.pdf