組換えタンパク質やプラスミドDNAの生産において、大腸菌（E.coli）を用いた発現・増幅法は、バイオ医薬品を調製する上で比較的簡便かつ費用対効果の高い方法です。しかし、E.coliを使用するプロセスでは、宿主細胞タンパク質（HCP）の不純物が必然的に混入し、製品の有効性を低下させたり、有害な毒性や免疫反応を引き起こしたりする可能性があります。そのため、最終的なバイオ医薬品中のHCP残留量を可能な限り低く抑える必要があります。

ELISAは、HCPに対する簡便で感度が高く、客観的な検査です。本キットは、二重抗体サンドイッチ酵素結合免疫吸着法（サンドイッチELISA）の原理を用いて、サンプル中のプラスミド中の大腸菌HCP残基を検出します。まず、大腸菌HCPプラスミド標準品（ 36721 - B ）と試験サンプルを抗大腸菌HCPコートマイクロタイターストリップ（36721-A）に加え、希釈したビオチン標識抗大腸菌HCP抗体（ 36721-C）を加え、最後にストレプトアビジン-HRP （ 36721-D）を加えて、抗体＋抗原＋抗体-ビオチン＋SA-HRP複合体を形成します。その後、 TMB基質（ 36721-H）を加えます。 複合体を洗浄した後、TMBを無色から青色へ、そして最終的に黄色へと変化させました。HRPase触媒による停止液（品番：36721-I）の存在下で、TMBは無色から青色へ、そして最終的に黄色へと変化しました。黄色の濃淡は、サンプル中に検出された大腸菌HCPの量と正の相関を示しました。このキットは、生物製剤の精製プロセスの最適化、中間プロセスにおける不純物の管理、最終製品の出荷試験に使用できます。

このキットの検出範囲は3.125〜200 ng/mL、検出下限は0.5 n g/mLです。

特徴

• 高感度:製造過程および最終的な生物学的サンプル中のE.coli HCP (プラスミド) 残留物を0.5 ng/mLまで検出します。
• 精度を保証: E.coli HCP (プラスミド)残留物は、 75 % ～ 125 %の回収率で正確に検出できます。
• 特異性: 他の外因性タンパク質からの干渉を受けずに E.coli HCP を特異的に検出します。
• 安定性:ロット間の差は小さく、37℃以下で7日間使用してもキットの特性に影響はありません。
• 簡単なシグナル収集：ビオチン-ストレプトアビジン システムを使用すると、シグナルを安定して拡大できます。

応用

• 生物学的製剤中の残留大腸菌i HCP （プラスミド）試験

仕様

製品パフォーマンス

コンポーネント

ストレージ

本製品は2℃～8℃で保管してください。未開封の場合は1年間有効です。

^*キットを受け取ったら、すべてのコンポーネントが揃っているかどうかを確認し、対応する状態ですぐに保管してください。

数字

高精度ディスプレイ

A)再現性

B)中精度

表1. E.coli HCP ELISAの精度は上記のスキームに従って評価されました

標準曲線上の3つの濃度で10回の重複試験を実施したところ、すべてのCV％が10 ％未満でした（表 1A ）。3ロットの大腸菌HCP ELISAキットを試験したところ、 CV％は1.5％未満でした（表 1B ）。

精度検証

A)希釈直線性

大腸菌を用いて増幅したプラスミドサンプル（濃度22.6 mg/mL、HCP濃度55 ng/mL）をサンプル希釈液で勾配希釈し、本キットを用いてHCP残留値を測定した。以下のデータから、本キットで測定したサンプル希釈度の直線性は良好であり、異なる希釈倍数におけるHCP測定値と初期濃度の差は小さく、直線回収率は80%～120%の範囲にあり、HCPの検出値は希釈倍数と直線的に相関していることがわかる。

表2 サンプル希釈直線性

B)急上昇回復率

大腸菌を使用して増幅されたプラスミドサンプル（濃度 22.6 mg/mL）を 2 倍に希釈し、各濃度の等量の標準物質と混合したところ、添加回収率は 80% ～ 120% の範囲でした。

添加回収率 % = (添加サンプルの測定値 - 添加していないサンプルの測定値) / 理論値（添加標準液の量） × 100％。

表3 サンプルスパイク回収率

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