説明
ピキア・パストリス発現システムは、翻訳後プロセッシング修飾を導入した高効率の真核生物発現システムであり、組換えタンパク質などの機能性生物学的製品の安定発現に広く用いられています。ピキア・パストリス発現システムを用いた製品は、製造および精製工程において宿主細胞タンパク質（HCP）不純物の混入を避けられません。これは製品の効能を低下させ、有害な毒性や免疫反応を引き起こす可能性があります。そのため、生物学的製品の最終製品におけるHCPの残留レベルを可能な限り低く抑える必要があります。
ELISAは、HCPに対する簡便で感度が高く、客観的な検査です。本キットは、二重抗体サンドイッチ酵素結合免疫吸着法（サンドイッチELISA）の原理を用いて、サンプル中の残留ピキア・パストリスHCPを検出します。まず、ピキア・パストリスHCP標準品（36720-B）と試験サンプルを抗ピキア・パストリスHCPコーティングマイクロタイターストリップ（36720-A）に加え、次に希釈したビオチン標識抗ピキア・パストリスHCP抗体（36720-C）を加え、最後にストレプトアビジン-HRP （ 36720-D）を加えて、抗体＋抗原＋抗体-ビオチン＋SA-HRP複合体を形成します。その後、 TMB基質（ 36720-H）を加えます。 複合体を洗浄した後、TMBを無色から青色へ、そして最終的に黄色へと変化させました。HRPase触媒による停止液（品番：36720-I）の存在下で、TMBは無色から青色へ、そして最終的に黄色へと変化しました。黄色の濃淡は、サンプル中に検出されたPichia pastoris HCPの量と正の相関を示しました。このキットは、生物製剤の精製プロセスの最適化、中間プロセスにおける不純物の管理、最終製品の出荷試験に使用できます。
このキットの検出範囲は3.125〜200 ng/mL、検出下限は0.5 n g/mLです。
特徴
- 高感度:製造過程および最終的な生物学的サンプル中のわずか0.5 ng/mL のPichia pastoris HCP残留物を検出します。
- 精度の保証: Pichia pastoris HCP残留物は、 75 % ～ 125 %の回収率で正確に検出できます。
- 特異性:他の外因性タンパク質からの干渉を受けずに、 Pichia pastoris HCP を特異的に検出します。
- 安定性:ロット間の差は小さく、37℃以下で7日間使用してもキットの特性に影響はありません。
- 簡単なシグナル収集：ビオチン-ストレプトアビジン システムを使用すると、シグナルを安定して拡大できます。
応用
生物学的製剤中の残留ピチア・パストリスHCP試験
仕様
|
感度 |
0.5 ng/mL (範囲 3.125~200 ng/mL) |
|
分析時間 |
4時間未満 |
|
アッセイ原理 |
2部位免疫酵素アッセイ |
|
信号増幅 |
ビオチン-ストレプトアビジン系 |
|
検出波長 |
450nm～630nm |
製品パフォーマンス
|
製品性能検証プログラム |
参照標準または要件 |
イェーセン |
|
|
1.キットの基準 |
自家製の標準が利用可能 |
ピキア パストリスHCP 凍結乾燥粉末 |
|
|
2.線形範囲 |
アッセイ範囲 |
実際の状況を参照する |
3.125～200 ng/mL |
|
R2 |
≥0.98 |
≥0.99以上 |
|
|
各濃度の検出値CV |
CV≤15% |
CV≤5% |
|
|
3. 正確性 |
回復率 |
50%～150% |
70%～130%以上 |
|
4. 精度 |
再現性 |
CV≤15% |
10%未満 |
|
中精度 |
CV≤15% |
15%未満 |
|
|
5. 独占性 |
他のタンパク質製品との干渉なし |
他の外因性タンパク質の干渉なしにPichia pastoris HCPを特異的に検出 |
|
|
6. 感受性 |
定量限界 |
対象物質の最小濃度を確実に定量 |
1.5 ng/mL |
|
検出限界 |
実際の状況を参照する |
0.5 ng/mL |
|
|
7. 耐久性 |
試薬の安定性 |
異なる保管温度が試薬の性能に及ぼす影響を評価する |
7日間4°C、7日間37°C、T0との差は80～120% |
|
機器の互換性 |
キットはテスト結果に影響を与えることなく、さまざまなデバイスで使用できます。 |
多くの種類のマイクロプレートリーダーと互換性があります（例：Molecular Devices マイクロプレートリーダー） |
|
コンポーネント
|
コンポーネント番号 |
名前 |
36720ES48 |
36720ES96 |
|
36720 -A |
抗ピキア・パストリスコーティングマイクロタイターストリップ |
48トン |
96トン |
|
36720 -B |
標準物質：ピキア・パストリスHCP（10μg/mL） |
50μL |
100μL |
|
36720 -C |
検出抗体：ビオチン結合抗体（50×） |
150μL |
300μL |
|
36720 -D |
ストレプトアビジン-HRP（100×） |
75μL |
150μL |
|
36720 -E |
希釈バッファー1 |
25mL |
50mL |
|
36720 -F |
洗浄バッファー濃縮液（ 20× ） |
25mL |
50mL |
|
36720 - G |
希釈バッファー2 |
15mL |
30mL |
|
36720 -H |
TMB基質 |
6mL |
12mL |
|
36720 -I |
停止ソリューション |
5mL |
10mL |
|
36720 -J |
プレートシーラー |
3個ずつ |
5個ずつ |
ストレージ
本製品は2℃～8℃で保管してください。未開封の場合は1年間有効です。
*キットを受け取ったら、すべてのコンポーネントが揃っているかどうかを確認し、対応する状態ですぐに保管してください。
数字
高精度ディスプレイ
A)再現性
|
スパイクサンプル |
アッセイ内 |
||
|
重複 |
平均濃度（ng/mL） |
CV （％） |
|
|
S- 100 ng/mL |
10 |
103.65 |
7.41% |
|
S- 25 ng/mL |
10 |
23.63 |
1.54% |
|
S -6.25 ng/mL |
10 |
5.71 |
0.19% |
B)中精度
表1. Pichia pastoris HCP ELISAの精度は上記のスキームに従って評価された。
|
スパイクサンプル |
インターアッセイ |
||
|
重複 |
平均濃度（ng/mL） |
CV （％） |
|
|
S- 100 ng/mL |
30 |
100.35 |
8.32% |
|
S- 25 ng/mL |
30 |
23.27 |
3.87% |
|
S -6.25 ng/mL |
30 |
5.43 |
7.65% |
標準曲線上の3つの濃度で10回の重複試験を実施したところ、すべてのCV％が10 ％未満でした（表 1 A）。3ロットのPichia pastoris HCP ELISAキットをテストしたところ、 CV％は1.5％未満でした（表 1B ）。
精度検証
A) 希釈直線性
ピキア・パストリス（Pichia pastoris）が発現させた組換えタンパク質を用いた中間精製サンプル（サンプルタンパク質濃度20 mg/mL、HCP濃度1024 μg/mL）について、希釈倍数マッピングを行い、HCP残留濃度が標準曲線の範囲内となるようにしました。以下のデータから、本キットで測定したサンプルの希釈直線性は良好であり、異なる希釈倍数におけるHCP測定値と理論濃度の差は小さく、直線回収率は80%～120%の範囲にあり、HCP検出値は希釈倍数と直線的に相関していることが分かります。
表2 サンプル希釈直線性
|
サンプル名 |
希釈係数 |
希釈HCPの理論値（ng/mL） |
実際のHCP測定値（ng/mL） |
回収率（％） |
|
組み換えタンパク質中間精製サンプル |
8000 |
128 |
103.239 |
80.66% |
|
16000 |
64 |
59.414 |
92.83% |
|
|
32000 |
32 |
32.094 |
100.29% |
|
|
64000 |
16 |
17.692 |
110.58% |
|
|
128000 |
8 |
9.491 |
118.64% |
B)急上昇回復率
ピキア パストリスによって発現された組み換えタンパク質を使用して中間精製サンプルを 32,000 倍希釈した後(サンプルタンパク質濃度 20 mg/mL、HCP 濃度 1024 μg/mL)、サンプル中のピキア パストリス HCP の含有量は 12.48 ng/mL でした。この 32,000 倍希釈サンプル (S と呼ぶ) を等量で各濃度の標準と混合したところ、サンプル添加回収率はすべて 80% から 120% の範囲であることが示されました。サンプル添加回収実験では、添加回収率はすべて 80% から 120% の間であることが示されました。
添加回収率 % = (添加サンプルの測定値 - 添加していないサンプルの測定値) / 理論値（添加標準液の量） × 100％。
表3 サンプルスパイク回収率
|
サンプル |
検出平均値（ng/mL） |
回収率（％） |
|
S |
12.48 |
/ |
|
S+ 200 ng/mL |
94.75 |
82.27% |
|
S+ 100 ng/mL |
54.39 |
83.81% |
|
S+ 50 ng/mL |
33.43 |
83.82% |
|
S+25 ng/mL |
23.15 |
85.39% |
|
S+12.5 ng/mL |
17.98 |
88.04% |
|
S+6.25 ng/mL |
15.34 |
91.53% |
|
S+3.125 ng/mL |
14.02 |
98.83% |
文書:
安全データシート
マニュアル
支払いとセキュリティ
お支払い情報は安全に処理されます。 クレジットカードの詳細を保存したり、クレジットカード情報にアクセスすることはありません
問い合わせ
あなたも好きかもしれません
よくある質問
この製品は研究目的のみに使用され、人間や動物の治療や診断に使用することを意図したものではありません。製品とコンテンツは、
特定のアプリケーションでは、追加のサードパーティの知的財産権が必要になる場合があります。