説明
プロテインA精製媒体は、ほとんどの抗体に特異的に吸着するため、抗体医薬品の製造プロセスで広く使用されています。プロテインAは精製媒体に共有結合していますが、精製プロセス中に一定確率で脱落し、残留します。プロテインA ELISAキットは、サンプル中の残留プロテインAを正確に定量できるELISAキットであり、抗体精製時のプロセス最適化、重要な品質パラメータの評価、中間製品および最終製品中のプロテインA残留物の検出に使用できます。
このキットは、二重抗体サンドイッチ酵素結合免疫吸着測定 (ELISA) の実験原理を応用して、プロテイン A の残留物を検出します。プロテイン A 標準物質 (36716-B) と試験するサンプルを、抗プロテイン A 抗体でプレコートしたプロテイン A キャプチャーマイクロウェルストリップ (36716-A) に加え、次に希釈したビオチン標識プロテイン A 検出抗体 (36716-C) を加え、最後にストレプトアビジン-HRP (SA-HRP) (36716-D) を加えて、抗体 + 抗原 + 抗体-ビオチン + SA-HRP 複合体を形成します。プレートを洗浄した後、TMB 発色溶液 (36716-F) を加えて発色させます。TMB は、HRP 酵素の触媒作用で無色から青色に、最後に停止溶液 (36716-G) の作用で黄色に変化しました。
このキットの検出範囲は15.625～1000 p g/mL ; 検出下限値は5.6 p g/mLです。
特徴
- 高感度： 5.6から検出 製造途中および最終的な生物学的サンプル中のタンパク質 A残留物(p g/mL) 。
- 精度を保証:タンパク質 A残留物は、 75 % ～ 125 %の回収率で正確に検出できます。
- 特異性:他の外因性タンパク質からの干渉を受けずにタンパク質 Aを特異的に検出します。
- 安定性:ロット間の差は小さく、37℃以下で7日間使用してもキットの特性に影響はありません。
- 簡単なシグナル収集：ビオチン-ストレプトアビジン システムを使用すると、シグナルを安定して拡大できます。
応用
生物学的製剤の残留タンパク質A試験
仕様
|
感度 |
5.6 ng/mL (範囲 15.625~1000 pg/mL) |
|
分析時間 |
4時間未満 |
|
アッセイ原理 |
2部位免疫酵素アッセイ |
|
信号増幅 |
ビオチン-ストレプトアビジン系 |
|
検出波長 |
450nm～630nm |
製品パフォーマンス
|
製品性能検証プログラム |
参照標準または要件 |
イェーセン |
|
|
1.キットの基準 |
自家製の標準が利用可能 |
プロテインA凍結乾燥粉末 |
|
|
2.線形範囲 |
アッセイ範囲 |
実際の状況を参照する |
15.625～1000 pg/mL |
|
R2 |
≥0.98 |
≥0.99以上 |
|
|
各濃度の検出値CV |
CV≤15% |
CV≤5% |
|
|
3. 正確性 |
回復率 |
50%～150% |
70%～130%以上 |
|
4. 精度 |
再現性 |
CV≤15% |
10%未満 |
|
中精度 |
CV≤15% |
15%未満 |
|
|
5. 独占性 |
さまざまなブランドのプロテインAを検出できます |
いくつかの主要ブランドのプロテインA ELISAキットでプロテインA標準物質を正確に検出できます |
|
|
6. 感受性 |
定量限界 |
対象物質の最小濃度を確実に定量 |
7.8125 pg/mL |
|
検出限界 |
実際の状況を参照する |
5.6 pg/mL |
|
|
7. 耐久性 |
試薬の安定性 |
異なる保管温度が試薬の性能に及ぼす影響を評価する |
4°C で 7 日間、37°C で 7 日間、T0 との差は 70 ～ 130% の範囲です。 |
|
機器の互換性 |
キットはテスト結果に影響を与えることなく、さまざまなデバイスで使用できます。 |
多くの種類のマイクロプレートリーダーと互換性があります（例：Molecular Devices マイクロプレートリーダー） |
|
コンポーネント
|
コンポーネント番号 |
名前 |
36716ES48 |
36716ES96 |
|
36716-A |
抗プロテインAコーティングマイクロタイターストリップ |
48T |
96トン |
|
36716-B |
プロテインA標準液（ 1μg/mL ） |
5 0μL |
100μL |
|
36716-C |
検出抗体：ビオチン結合抗体（ 120× ） |
5 0μL |
100μL |
|
36716-D |
ストレプトアビジン-HRP （ 500× ） |
30μL |
60μL |
|
36716-E |
希釈バッファー（ 5× ） |
2 5mL |
50mL |
|
36716-F |
洗浄バッファー濃縮液（ 20× ） |
2 5mL |
50mL |
|
36716-G |
TMB基質 |
6mL |
1 2 mL |
|
36716-H |
停止ソリューション |
5mL |
10mL |
|
36716-I |
プレートシーラー |
3個ずつ |
5個ずつ |
ストレージ
本製品は2℃～8℃で保管してください。未開封の場合は1年間有効です。
*キットを受け取ったら、すべてのコンポーネントが揃っているかどうかを確認し、対応する状態ですぐに保管してください。
数字
特異性の実証
EブランドのプロテインA ELISAキットとYeasenのプロテインA ELISAキットを使用して、4種類の異なるプロテインAを検出しました。そのうち3種類はキットの標準で、もう1種類は市場の主要なプロテインAリガンドです。Yeasenの製品は、主要なプロテインA ELISAキットのプロテインA標準を正確に検出することができ、抗体生産における主要なプロテインAパッケージのプロテインAリガンドの検出能力はEブランドと同等かそれ以上です。Yeasen製品は、市場の主要なプロテインA ELISAキットのいくつかでプロテインA標準を正確に検出することができ、Yeasen製品は、ブランドEと比較して、抗体生産で使用される主要なプロテインAフィラーのプロテインAリガンドの検出能力は同等かそれ以上です。
表1. Yeasen Protein A ELISAキットの特異性は上の表に示されている。
|
プロテインA |
ブランド |
|
|
イェーセン |
Eブランド |
|
|
イェーセン |
100.00% |
121.50% |
|
Jブランド |
97.20% |
99.30% |
|
Eブランド |
80.63% |
100.00% |
|
組み換えタンパク質A-1 |
95.50% |
65.70% |
高精度ディスプレイ
A)再現性
|
スパイクサンプル |
アッセイ内 |
||
|
重複 |
平均濃度（ng/mL） |
CV （％） |
|
|
S- 250 ng/mL |
10 |
271.23 |
3.8% |
|
S- 62.5 ng/mL |
10 |
60.38 |
6.0% |
|
S- 15.625 ng/mL |
10 |
17.21 |
4.5% |
B)中精度
表2. プロテインA ELISAの精度は上記のスキームに従って評価された。
|
スパイクサンプル |
インターアッセイ |
||
|
重複 |
平均濃度（ng/mL） |
CV （％） |
|
|
S- 250 ng/mL |
30 |
270.32 |
4.3% |
|
S- 62.5 ng/mL |
30 |
63.2 |
6.1% |
|
S- 15.625 ng/mL |
30 |
17.94 |
10.2% |
標準曲線上の3つの濃度で10回の重複試験を実施したところ、すべてのCV％が10 ％未満でした（表 1 A）。3ロットのプロテインA ELISAキットをテストしたところ、 CV％は1.5％未満でした（表 1B ）。
精度検証
34 μg/mL hIgG標準サンプルに異なる濃度のプロテインAを添加したところ、添加していないサンプルでも同時にプロテインAが検出されました。添加サンプルの回収率は、hIgGを含むサンプル中の異なる濃度のプロテインAに対して90%～110%の範囲でした。
表3. 精度検証
|
追加された基準の集中 （ pg/mL ） |
34 μg/mL hIgG添加標準液 |
|
|
測定値（ pg/mL ） |
回復率 |
|
|
S-500 pg/mL |
539.099 |
101.1% |
|
S-250 pg/mL |
280.190 |
98.6% |
|
S-125 pg/mL |
156.64 9 |
98.4% |
|
S-62.5 pg/mL |
97.074 |
101.4% |
|
S-31.25 pg/mL |
64.63 7 |
99.1% |
|
S-15.625 pg/mL |
49.550 |
101.6% |
|
S-7.8125 pg/mL |
42.206 |
109.1% |
|
スパイクなしのサンプル |
33.68 3 |
/ |
文書:
安全データシート
マニュアル
支払いとセキュリティ
お支払い情報は安全に処理されます。 クレジットカードの詳細を保存したり、クレジットカード情報にアクセスすることはありません
問い合わせ
あなたも好きかもしれません
よくある質問
この製品は研究目的のみに使用され、人間や動物の治療や診断に使用することを意図したものではありません。製品とコンテンツは、
特定のアプリケーションでは、追加のサードパーティの知的財産権が必要になる場合があります。