一部のタンパク質やプラスミドDNAの生産において、大腸菌を用いた組換え発現は比較的簡便かつ費用対効果の高い方法です。大腸菌を製品生産に用いるプロセスでは、大腸菌由来の宿主細胞タンパク質（HCP）が汚染される可能性があり、この汚染は治療薬の効能を低下させ、望ましくない毒性反応や免疫反応を引き起こす可能性があります。そのため、ヒトまたは動物に使用する治療薬の精製においては、この汚染物質のレベルを最小限に抑える必要があります。

ELISAは、HCPに対する簡便で感度が高く、客観的な検査です。本キットは、二重抗体サンドイッチ酵素結合免疫吸着法（サンドイッチELISA）の原理を用いて、サンプル中の残留E.coli HCPを検出します。まず、E.coli HCP標準液と試験サンプルを抗E.coli HCPマイクロタイターストリップ（品番：36712-A）に加え、次に希釈したビオチン標識抗E.coli HCP抗体（品番：36712-C）を加え、最後にストレプトアビジン-HRP（品番：36712-D）を加えて、抗体＋抗原＋抗体-ビオチン＋SA-HRP複合体を形成します。その後、 TMB基質（品番：36712-G）を加えます。 複合体を洗浄した後、TMBを無色から青色へ、そして最終的に黄色へと変化させました。HRPase触媒による停止液（品番：36712-H）の存在下で、TMBは無色から青色へ、そして最終的に黄色へと変化しました。黄色の濃淡は、サンプル中に検出された大腸菌HCPの量と正の相関を示しました。本キットは、生物製剤の精製プロセスの最適化、中間プロセスにおける不純物の管理、最終製品の出荷試験に使用できます。

このキットの検出範囲は3.125〜200 ng/mL、検出下限は2.22 n g/mLです。

特徴

• 高感度:製造工程中および最終的な生物学的サンプル中のE.coli HCP残留物をわずか2.22 ng/mLまで検出します。
• 精度を保証: E.coli HCP残留物は、 75 % ～ 125 %の回収率で正確に検出できます。
• 特異性: 他の外因性タンパク質からの干渉を受けずに E.coli HCP を特異的に検出します。
• 安定性:ロット間の差は小さく、37℃以下で7日間使用してもキットの特性に影響はありません。
• 簡単なシグナル収集：ビオチン-ストレプトアビジン システムを使用すると、シグナルを安定して拡大できます。

応用

• 生物学的製剤中の残留大腸菌HCP試験

仕様

製品パフォーマンス

コンポーネント

^*標準品(36712-B)は凍結乾燥粉末です。

ストレージ

本製品は2℃～8℃で保管してください。未開封の場合は1年間有効です。

^*キットを受け取ったら、すべてのコンポーネントが揃っているかどうかを確認し、対応する状態ですぐに保管してください。

図​

特異性の実証

図1. E.coli HCP ELISAキットの特異性は上の図に示されている。

キットに含まれる抗体との非特異的反応が9つのサンプルで推定されました。9つのサンプルの濃度はすべて定量限界（LOQ）（2.22 ng/mL）を下回っていました。

高精度ディスプレイ

A) 再現性

B)中精度

表1. E.coli HCP ELISAの精度は上記のスキームに従って評価されました

8つの重複試験を標準曲線上の3つの濃度で試験したところ、すべてのCV％が10 ％未満でした（表 1A ）。3ロットの大腸菌HCP ELISAキットを試験したところ、 CV％は1.5％未満でした（表 1B ）。

精度検証

高、中、低の 3 つの濃度の E.coli HCP 標準を、E.coli 発現精製タンパク質 (いくつかの残基のない HCP) 10 μg/mL に等量で添加し、高値で添加したサンプルは倍数希釈にしました。

二重希釈サンプル、さまざまな添加濃度のサンプル、および無添加サンプル中の HCP が、80% ～ 120% の範囲の線形および添加回収率で検出されました。

添加回収率 = 測定値 / (添加標準値 x 50% + 添加検体値 x 50%)

表2. 精度検証

二重希釈サンプル、異なる添加濃度のサンプル、および無添加サンプルにおける大腸菌HCPの直線回収率および添加回収率は、80%から12.5 %の範囲であった（表 2 ）。

文書:

安全データシート

36712_MSDS_HB20250310_EN.PDF

マニュアル

36712_マニュアル_Ver.EN20250310.pdf