説明
この無機ピロホスファターゼ（PPase）残留検出キットは、二抗体サンドイッチELISA法を用いて、mRNAワクチン製品中の残留PPaseを検出します。PPaseはピロリン酸からリン酸への変換を触媒し、製造におけるmRNA収量の向上に貢献します。しかし、製品の品質を確保するためには、精製時にPPaseを除去する必要があり、その残留物を検査して除去が効果的であることを確認する必要があります。
検出プロセスでは、PPase標準サンプルと試験サンプルの両方を抗PPase抗体をコーティングしたマイクロタイターストリップに加えます。その後、ビオチン標識抗PPase抗体とストレプトアビジン-HRPを添加して抗体-抗原複合体を形成します。次にTMB基質を添加します。青から黄色への色の変化はサンプル中のPPase量を示します。色の濃さはPPase濃度に正比例します。
キットの検出範囲は0.25～16 ng/mLで、検出下限は0.165 ng/mLです。
特徴
- 高感度:製造過程および最終的な生物学的サンプル中のわずか0.165 ng/mL の無機ピロホスファターゼ残留物を検出します。
- 精度を保証:無機ピロホスファターゼ残留物は、 75 % ～ 125 % の回収率で正確に検出できます。
- 特異性: YEASEN無機ピロホスファターゼと併用 残留物を正確に検出することができます。
- 安定性:ロット間の差は小さく、37℃以下で7日間使用してもキットの特性に影響はありません。
- 簡単なシグナル収集：ビオチン-ストレプトアビジン システムを使用すると、シグナルを安定して拡大できます。
応用
- 生物学的製剤中の残留無機ピロホスファターゼ試験
- mRNA ワクチンおよび治療薬製造における残留タンパク質検出
- 核酸合成およびin vitro転写（IVT）における精製検証
仕様
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カタログ番号。 |
サイズ |
価格 |
|
36706ES48 |
48トン |
764ドル |
|
36706ES96 |
96トン |
1376ドル |
財産
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検出範囲 |
0.25～16 ng/mL |
|
感度 |
0.165 ng/mL |
|
分析時間 |
3.5時間 |
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アッセイ原理 |
二重抗体サンドイッチ法 |
|
希釈直線性 |
希釈されていないサンプルとの差 <20% |
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信号増幅 |
ビオチン-ストレプトアビジン系 |
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回復率 |
70%～130% |
|
検出波長 |
450 nm～630 nm |
|
プレート内差異 |
10%未満 |
|
プレート間差 |
15%未満 |
コンポーネント
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コンポーネント番号 |
名前 |
36706ES48 |
36706ES96 |
|
36706 -A |
抗PPaseコーティングマイクロタイターストリップ |
48トン |
96トン |
|
36706 -B * |
標準: PPase |
1バイアル |
2バイアル |
|
36706 -C |
検出抗体：ビオチン結合抗体（200×） |
40μL |
80μL |
|
36706 -D |
ストレプトアビジン-HRP |
20μL |
40μL |
|
36706 -E |
希釈バッファー1 |
25mL |
45mL |
|
36706 -F |
洗浄バッファー濃縮液（ 20× ） |
25mL |
50mL |
|
36706 -G |
希釈バッファー2 |
15mL |
30mL |
|
36706 -H |
TMB 基板 |
8mL |
15mL |
|
36706 -I |
停止ソリューション |
5mL |
10mL |
|
36706 -J |
プレートシーラー |
3個ずつ |
5個ずつ |
*標準品(36706-B)は凍結乾燥粉末です。
ストレージ
本製品は2℃～8℃で保管してください。未開封の場合は1年間有効です。
*キットを受け取ったら、すべてのコンポーネントが揃っているかどうかを確認し、対応する状態ですぐに保管してください。
数字
- 精度
A)再現性
|
スパイクサンプル |
アッセイ内 |
||
|
重複 |
平均濃度（ng/mL） |
CV （％） |
|
|
S- 8 ng/mL |
10 |
6.754 |
4.2% |
|
S- 2 ng/mL |
10 |
2.006 |
2.1% |
|
S -0.25 ng/mL |
10 |
0.199 |
9.9% |
B)中精度
|
スパイクサンプル |
インターアッセイ |
||
|
重複 |
平均濃度（ng/mL） |
CV （％） |
|
|
S- 8 ng/mL |
3 0 |
6.788 |
6.3% |
|
S- 2 ng/mL |
3 0 |
1.991 |
4.3% |
|
S -0.25 ng/mL |
3 0 |
0.213 |
14.6% |
テーブル 1.無機ピロホスファターゼELISAの精度は上記のように評価された。 スキーム
標準曲線上の3つの濃度で10回の繰り返し試験を実施したところ、すべてのCV%は10 %未満でした（表 1 A）。3ロットのSalt Active UltraNuclease ELISAキットをテストしたところ、 CV%は1.5%未満でした（表 1B ）。
- 正確さ
高、中、低の 3 つの濃度の無機ピロホスファターゼ標準を mRNA 精製サンプルに等量ずつ添加し、高濃度の添加サンプルは倍数希釈しました。
添加回収率 = 測定値 / (添加標準値 x 50% + 添加検体値 x 50%)
テーブル 2.精度の検証
|
サンプル希釈率 |
測定値（ng/mL） |
希釈直線性 |
サンプルスパイク |
測定値（ng/mL） |
回復率 |
|
S+Std1 |
8.223 |
/ |
S+Std1 |
8.223 |
100.1% |
|
2× |
3.980 |
96.8% |
S+Std3 |
1.973 |
89.1% |
|
4× |
1.865 |
93.7% |
S+Std5 |
0.550 |
76.9% |
|
8× |
0.921 |
98.8% |
S （サンプル） |
0.431 |
/ |
|
16× |
0.482 |
104.7% |
/ |
/ |
/ |
無機ピロホスファターゼの直線回収率および添加回収率は、二重希釈サンプル、添加濃度を変えたサンプル、無添加サンプルともに80%から120%の範囲であった（表 2 ）。
文書:
安全データシート
マニュアル
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