説明
Salt Active UltraNucleaseは、海洋微生物由来の非特異的エンドヌクレアーゼであり、遺伝子組換え技術を用いて大腸菌(E. coli)で発現・精製されています。この非特異的組換えエンドヌクレアーゼは、高塩濃度(500mM NaCl)で最適な活性を示し、様々なワークフローにおいて効率と収量を向上させることができます。
このキットは、二重抗体サンドイッチ酵素結合免疫吸着法(サンドイッチELISA)の原理を利用して、サンプル中の残留Salt Active UltraNucleaseを検出します。まず、Salt Active UltraNuclease標準液と試験サンプルをAnti-Salt Active UltraNucleaseでコーティングしたマイクロタイターストリップ(36719-A)に加え、希釈したビオチン標識Anti-UltraNuclease抗体(36719-C)を加え、最後にStreptavidin-HRP(36719-D)を加えて抗体+抗原+抗体-ビオチン+SA-HRP複合体を形成します。その後、複合体にTMB基質(36719-H)を加え、複合体を洗浄した後の呈色反応を観察します。TMBはHRP酵素の触媒作用で青色に、酸の存在下では最終的に黄色に変化します。色合いはサンプル中のSalt Active UltraNucleaseの量と正の相関関係にあります。
このキットの検出範囲は 0.047 ~ 3 ng/mL、検出下限は0.024 n g/mL です。
特徴
- 高感度: 製造過程および最終的な生物学的サンプル中の 0.024 ng/mL という少量の Salt Active UltraNuclease 残留物を検出します。
- 精度を保証: Salt Active UltraNuclease の残留物は、75% ~ 125% の回収率で正確に検出できます。
- 特異性: YEASEN Salt Active UltraNuclease と連携して使用することで、残留物を正確に検出できます。
- 安定性:ロット間の差は小さく、37℃以下で7日間使用してもキットの特性に影響はありません。
- 簡単なシグナル収集:ビオチン-ストレプトアビジン システムを使用すると、シグナルを安定して拡大できます。
応用
- 生物学的製剤における残留塩活性ウルトラヌクレアーゼ試験
仕様
感度 |
0.024 ng/mL (範囲 0.047~3 ng/mL) |
分析時間 |
4時間未満 |
アッセイ原理 |
2部位免疫酵素アッセイ |
信号増幅 |
ビオチン-ストレプトアビジン系 |
検出波長 |
450nm~630nm |
コンポーネント
コンポーネント番号 |
名前 |
36703ES96 |
36703-A |
抗塩活性ウルトラヌクレアーゼコーティングマイクロタイターストリップ |
96トン |
36703-B* |
標準: 塩活性ウルトラヌクレアーゼ |
2バイアル |
36703-C |
検出抗体:ビオチン結合抗体 |
120μL |
36703-D |
ストレプトアビジン-HRP |
60μL |
36703-E |
希釈バッファー1 |
50mL |
36703-F |
洗浄バッファー濃縮液(20×) |
50mL |
36703-G |
希釈バッファー2 |
30mL |
36703-H |
TMB基質 |
15mL |
36703-I |
停止ソリューション |
10mL |
36703-J |
プレートシーラー |
5個ずつ |
* 1. このキットには停止液は付属していませんので、ユーザーが用意する必要があります。停止液として 1M HCl を使用できます。
* 2. 標準品(36719-B)は凍結乾燥粉末です。
ストレージ
本製品は2℃~8℃で保管してください。未開封の場合は1年間有効です。開封後は半年有効です。
※キットを受け取ったら、すべての部品が揃っているかどうかを確認し、対応する状態ですぐに保管してください。
数字
- 高精度ディスプレイ
A)再現性
スパイクサンプル |
アッセイ内 |
||
重複 |
平均濃度(ng/mL) |
CV(%) |
|
S-1.5 ng/mL |
10 |
1.344 |
2.97% |
S-0.375 ng/mL |
10 |
0.260 |
2.27% |
S-0.094 ng/mL |
10 |
0.061 |
2.56% |
B)中精度
スパイクサンプル |
インターアッセイ |
||
重複 |
平均濃度(ng/mL) |
CV(%) |
|
S-1.5 ng/mL |
30 |
1.335 |
5.70% |
S-0.375 ng/mL |
30 |
0.258 |
5.59% |
S-0.094 ng/mL |
30 |
0.064 |
6.82% |
表1. Salt Active UltraNuclease ELISAの精度は上記のスキームに従って評価されました
標準曲線上の 3 つの濃度で 10 個の重複試験を実施したところ、すべての CV% が 5% 未満でした (図 2A)。3 ロットの Salt Active UltraNuclease ELISA キットをテストしたところ、CV% は 10% 未満でした (図 2B)。
- 精度検証
希釈係数 |
希釈回収率(%) |
希釈回収率の範囲(%) |
1:2 |
92.5 |
87.5~98.9 |
1:4 |
87.0 |
79.0-95.2 |
1:8 |
92.6 |
78.9-106.2 |
1:16 |
96.9 |
79.1-118.1 |
スパイクサンプル |
スパイク回復率(%) |
スパイク回復範囲(%) |
S-0.75ng/mL |
105.3 |
91.0-122.1 |
S-0.18ng/mL |
96.6 |
86.5~105.5 |
表2. UCF.ME™ UltraNuclease ELISAの精度は、以下の手順で評価されました。
高濃度のSalt Active UltraNucleaseを含むタンパク質サンプルを段階的に2倍希釈し、さらに0.75ng/mLおよび0.18ng/mLのSalt Active UltraNucleaseを添加しました。希釈回収率および添加回収率はいずれも75%~125%でした(図3)。
文書:
安全データシート
マニュアル
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よくある質問
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