説明
Salt Active UltraNucleaseは、海洋微生物由来の非特異的エンドヌクレアーゼであり、遺伝子組換え技術を用いて大腸菌(E. coli)で発現・精製されています。この非特異的組換えエンドヌクレアーゼは、高塩濃度(500mM NaCl)で最適な活性を示し、様々なワークフローにおいて効率と収量を向上させることができます。
このキットは、二重抗体サンドイッチ酵素結合免疫吸着法(サンドイッチELISA)の原理を利用して、サンプル中の残留Salt Active UltraNucleaseを検出します。まず、Salt Active UltraNuclease標準液と試験サンプルをAnti-Salt Active UltraNucleaseでコーティングしたマイクロタイターストリップ(36719-A)に加え、希釈したビオチン標識Anti-UltraNuclease抗体(36719-C)を加え、最後にStreptavidin-HRP(36719-D)を加えて抗体+抗原+抗体-ビオチン+SA-HRP複合体を形成します。その後、複合体にTMB基質(36719-H)を加え、複合体を洗浄した後の呈色反応を観察します。TMBはHRP酵素の触媒作用で青色に、酸の存在下では最終的に黄色に変化します。色合いはサンプル中のSalt Active UltraNucleaseの量と正の相関関係にあります。
このキットの検出範囲は 0.047 ~ 3 ng/mL、検出下限は0.024 n g/mL です。
特徴
- 高感度: 製造過程および最終的な生物学的サンプル中の 0.024 ng/mL という少量の Salt Active UltraNuclease 残留物を検出します。
 - 精度を保証: Salt Active UltraNuclease の残留物は、75% ~ 125% の回収率で正確に検出できます。
 - 特異性: YEASEN Salt Active UltraNuclease と連携して使用することで、残留物を正確に検出できます。
 - 安定性:ロット間の差は小さく、37℃以下で7日間使用してもキットの特性に影響はありません。
 - 簡単なシグナル収集:ビオチン-ストレプトアビジン システムを使用すると、シグナルを安定して拡大できます。
 
応用
- 生物学的製剤における残留塩活性ウルトラヌクレアーゼ試験
 
仕様
| 
  感度  | 
 0.024 ng/mL (範囲 0.047~3 ng/mL)  | 
| 
 分析時間  | 
 4時間未満  | 
| 
 アッセイ原理  | 
 2部位免疫酵素アッセイ  | 
| 
 信号増幅  | 
 ビオチン-ストレプトアビジン系  | 
| 
 検出波長  | 
 450nm~630nm  | 
コンポーネント
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 コンポーネント番号  | 
 名前  | 
 36703ES96  | 
| 
 36703-A  | 
 抗塩活性ウルトラヌクレアーゼコーティングマイクロタイターストリップ  | 
 96トン  | 
| 
 36703-B*  | 
 標準: 塩活性ウルトラヌクレアーゼ  | 
 2バイアル  | 
| 
 36703-C  | 
 検出抗体:ビオチン結合抗体  | 
 120μL  | 
| 
 36703-D  | 
 ストレプトアビジン-HRP  | 
 60μL  | 
| 
 36703-E  | 
 希釈バッファー1  | 
 50mL  | 
| 
 36703-F  | 
 洗浄バッファー濃縮液(20×)  | 
 50mL  | 
| 
 36703-G  | 
 希釈バッファー2  | 
 30mL  | 
| 
  36703-H  | 
 TMB基質  | 
 15mL  | 
| 
 36703-I  | 
 停止ソリューション  | 
 10mL  | 
| 
 36703-J  | 
 プレートシーラー  | 
 5個ずつ  | 
* 1. このキットには停止液は付属していませんので、ユーザーが用意する必要があります。停止液として 1M HCl を使用できます。
* 2. 標準品(36719-B)は凍結乾燥粉末です。
ストレージ
本製品は2℃~8℃で保管してください。未開封の場合は1年間有効です。開封後は半年有効です。
※キットを受け取ったら、すべての部品が揃っているかどうかを確認し、対応する状態ですぐに保管してください。
数字
- 高精度ディスプレイ
 
A)再現性
| 
 スパイクサンプル  | 
 アッセイ内  | 
||
| 
 重複  | 
 平均濃度(ng/mL)  | 
 CV(%)  | 
|
| 
 S-1.5 ng/mL  | 
 10  | 
 1.344  | 
  2.97%  | 
| 
 S-0.375 ng/mL  | 
 10  | 
 0.260  | 
 2.27%  | 
| 
 S-0.094 ng/mL  | 
 10  | 
 0.061  | 
 2.56%  | 
B)中精度
| 
 スパイクサンプル  | 
 インターアッセイ  | 
||
| 
 重複  | 
 平均濃度(ng/mL)  | 
 CV(%)  | 
|
| 
 S-1.5 ng/mL  | 
 30  | 
 1.335  | 
 5.70%  | 
| 
 S-0.375 ng/mL  | 
 30  | 
 0.258  | 
 5.59%  | 
| 
 S-0.094 ng/mL  | 
 30  | 
 0.064  | 
 6.82%  | 
表1. Salt Active UltraNuclease ELISAの精度は上記のスキームに従って評価されました
標準曲線上の 3 つの濃度で 10 個の重複試験を実施したところ、すべての CV% が 5% 未満でした (図 2A)。3 ロットの Salt Active UltraNuclease ELISA キットをテストしたところ、CV% は 10% 未満でした (図 2B)。
- 精度検証
 
| 
 希釈係数  | 
 希釈回収率(%)  | 
  希釈回収率の範囲(%)  | 
| 
 1:2  | 
 92.5  | 
 87.5~98.9  | 
| 
 1:4  | 
 87.0  | 
 79.0-95.2  | 
| 
 1:8  | 
 92.6  | 
 78.9-106.2  | 
| 
 1:16  | 
 96.9  | 
 79.1-118.1  | 
| 
 スパイクサンプル  | 
 スパイク回復率(%)  | 
 スパイク回復範囲(%)  | 
| 
 S-0.75ng/mL  | 
 105.3  | 
 91.0-122.1  | 
| 
 S-0.18ng/mL  | 
 96.6  | 
 86.5~105.5  | 
表2. UCF.ME™ UltraNuclease ELISAの精度は、以下の手順で評価されました。
高濃度のSalt Active UltraNucleaseを含むタンパク質サンプルを段階的に2倍希釈し、さらに0.75ng/mLおよび0.18ng/mLのSalt Active UltraNucleaseを添加しました。希釈回収率および添加回収率はいずれも75%~125%でした(図3)。
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