説明
組み換えエンテロキナーゼ ウシエンテロキナーゼ軽鎖の高純度組換え断片であり、ウシエンテロキナーゼ軽鎖と同一のアミノ酸配列を有しています。天然抽出エンテロキナーゼと同じ特異的切断部位（Asp-Asp-Asp-Asp-Lys（DDDDK））を有しています。タンパク質のN末端に位置する融合タンパク質の除去に使用でき、不要な融合タグを除去することで、組換え融合タンパク質のN末端配列の正確性を確保します。また、組換えエンテロキナーゼは天然酵素よりも高い切断活性を有しています。
組換えエンテロキナーゼ（ Hisタグ）は、ピキア・パストリス（Pichia pastoris）の分泌物によって発現された、高純度、高活性、高特異性のウシエンテロキナーゼです。幅広いpH範囲（4.5～9.5）および温度範囲において、融合タンパク質を効果的に切断し、様々な界面活性剤や変性剤下でも部分的な活性を維持します。本製品はHisタグを有しており、切断反応後にNi 2+アフィニティーカラムで容易に除去できるため、その後の精製プロセスが大幅に簡素化されます。
特徴
- 強い特異性-カルボキシル末端を切断する特異的プロテアーゼ 先頭に4つのアスパラギン酸を含むリジン：Asp-Asp-Asp-Asp-Lys 。
- 高純度-他のプロテアーゼは使用せず、非特異的な切断も行われません。
- 動物不使用-組み換え生産のため、外因性ウイルス汚染がなく、生産プロセスでは動物由来の材料は使用されません。
- 品質の安定性:バッチ生産により、安定した継続的なバッチ製造が保証されます。製品バッチ間に違いがなく、一貫した品質が保証されます。
- 十分な容量: Yeasen は 5L から 1500L までの発酵槽を所有しており、さまざまな段階のさまざまなクライアントのさまざまなバッチ要件を満たします。
アプリケーション
- 融合ペプチドおよびタンパク質の製造プロセスでは、タンパク質のN末端にある融合タンパク質を除去して不要な融合タグを除去し、組み換え融合タンパク質の正確なN末端配列を確保するために使用されます。
- バイオ医薬品の分野では、GLP-1類似体ペプチド医薬品の製造および調製が一般的に使用されています。
仕様
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ソース |
酵母組換え発現 |
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分子量* |
理論値 22.7 kDa |
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外観 |
滅菌液 |
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ストレージバッファ |
50 mM トリス-HCl、250 mM NaCl、2 mM CaCl 2 、50% グリセロール、pH 8.0 |
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酵素濃度 |
5 U/μL |
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純度 |
≥95% |
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アクティビティ定義* |
1 活性単位は、緩衝液システム（20 mM Tris-HCl、50 mM NaCl、2 mM CaCl2、pH 8.0）中、25°C、12 ～ 16 時間の条件下で、エンテロキナーゼ切断部位（エンテロキナーゼ陽性基質、分子量約 64.6 kDa、カタログ番号 20391ES）を持つ 50 μg の融合タンパク質の 95% を切断するために必要な酵素の量として定義されます。 |
分子量: *Pichia pastoris での発現後のグリコシル化効果により、SDS-PAGE で示される対象タンパク質の分子量は約 40 kDa です。
活性定義： *切断効率は基質によって異なる場合があります。一般的に、小さなタンパク質ほど切断効率が高い傾向があります。Yeasenが定義した酵素活性は、分子量約64.6 kDaの大きなタンパク質を基準としています。オリゴペプチド基質の場合、通常、500 µgを切断するのに最大1ユニットに達します。
コンポーネント
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コンポーネント番号 |
名前 |
20395ES60 |
20395ES76 |
20395ES90 |
20395ES92 |
20395ES94 |
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20395 |
組み換えエンテロキナーゼ、Hisタグ |
500 U |
5000 U |
100 KU |
1 MU （ 1000 KU ） |
ストレージ
-25 ～ -15 ℃で1年間保存可能です。
形
1. エンテロキナーゼ活性試験
図1. Yeasenエンテロキナーゼ（カタログ番号20395ES）の酵素切断効果はサプライヤーN*と一致している
[注記]：本基質（品番： 20391ES）は、 DDDDK（エンテロキナーゼ認識切断部位）を介して連結された2つの特定のタンパク質配列からなる融合タンパク質であり、全体の分子量は約64.6 kDaです。エンテロキナーゼによって特異的に切断され、それぞれ分子量約27.9 kDaと36.6 kDaの2つの独立したタンパク質断片が産生されます。本製品は、エンテロキナーゼ基質として、組換えまたは天然エンテロキナーゼの半定量的または定性的な酵素活性検出に使用できます。
2. エンテロキナーゼ純度試験
図2. エンテロキナーゼ（カタログ番号20395ES）の純度は95％以上です
【注記】エンテロキナーゼの理論分子量は22.7 kDaです。Pichia pastorisでの発現後、糖鎖付加の影響により、SDS-PAGEでは標的タンパク質の分子量が約40 kDaであることが示されています。一般的に、糖鎖付加バンドはわずかに拡散した上向きのバンドとなります（右図参照）。弊社では、脱糖酵素Endo H（品番：20414）も提供しており、お客様が脱糖処理を行い、ゲル電気泳動で純度を測定することも可能となっています（左図参照）。
3. エンテロキナーゼ切断特異性試験
図3. Yeasenエンテロキナーゼ（20395ES）はサプライヤーN*よりも非特異的切断が少ない
【注記】：同一条件下で、易盛エンテロキナーゼ（20395ES）と輸入業者N社のエンテロキナーゼを用いて酵素切断試験を実施しました。その結果、精製後、易盛エンテロキナーゼ（20395ES）から生じた非特異的切断不純物は、N社*のものよりも著しく低いことが示されました。
4. エンテロキナーゼ繰り返し凍結融解加速安定性試験
図 4. Yeasen エンテロキナーゼ (Cat#20395ES) の繰り返し凍結融解、加速安定性試験では、酵素活性に大きな変化がないことが示されています。
[注記]：イェーセンエンテロキナーゼ（カタログ番号20395ES）をランダムに2バッチ選択し、凍結融解を10回、20回繰り返したが、酵素活性は初期の酵素活性から大きな変化はなかった。
25°C で 7、16、32 日間、37°C で 7、14 日間保存した場合、酵素活性は初期の酵素活性から大きな変化はありませんでした。
使用方法（応用例）
1. 反応システム：
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融合タンパク質 |
50 μg |
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エンテロキナーゼ |
0.1～1U（実際の条件に応じて調整可能） |
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反応バッファー （ 20 mMトリス-HCl、50 mM NaCl、2 mM CaCl 2 、 pH 8.0 ） |
最大50～500μL（タンパク質濃度0.1～1mg/mL） |
2.反応条件：よく混ぜ、25℃で16時間反応させる。
注：組み換えエンテロキナーゼは、25 mMトリス塩酸pH 8.0で希釈して、1μLあたり0.1 Uを含む溶液にすることができます。 使用のため。
注記
1. この酵素 は 非常に 強力であり、その活性 は シーケンスに関連するか 構造 の タンパク質 に なれ カット。 それ は テスト中に最初にタンパク質入力の勾配を作成し、最も適切な量を使用することをお勧めします。
2. 以下の条件は、rE K の活性に一貫した影響を及ぼす可能性があります。
1) 高いイオン強度は活性を阻害します。0.25M NaCl条件下では、 rEK本来の活性は 約 25%; 2 M NaCl 条件下では、rEK はほぼ完全に阻害されます。
2) その活性を阻害する試薬としては、>2 M尿素、>20 mM b -ME、>0.1% SDS、>50 mM イミダゾール等
3) pH<6 または pH>9 の条件でもその活性は阻害されます。
3.実験着や手袋などの必要な個人用保護具を着用し、 あなたの健康と安全！
4. 研究のため 使用のみ！
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