磁気残留DNAサンプル調製キットは、様々な生物学的サンプル中の残留DNAの前処理に適しています。独自の磁気ビーズと最適化されたバッファーシステムを用いることで、サンプル中の微量な宿主細胞残留DNAの分離・精製を最大限に高めることができます。

磁気残留 DNA サンプル調製キットは、CHO 宿主細胞 DNA 残留検出キット (カタログ番号 41301ES)、HEK293 宿主細胞 DNA 残留検出キット (カタログ番号 41302ES)、Vero 宿主細胞 DNA 残留検出キット (カタログ番号 41303ES)、および E.coli 宿主細胞 DNA 残留検出キット (カタログ番号 41304ES) を含むさまざまな宿主細胞残留 DNA 検出キットで使用できます。

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製品コンポーネント

配送と保管

1. パート I はアイスパックとともに出荷され、1 年間は 4°C、長期保管の場合は -20°C で保管されます。

2. パート II は室温で出荷され、室温で 1 年間保存されます。

3. パート III はドライアイスで出荷され、-20°C で 1 年間保管されます。

4.商品を受け取ったら、パートI、パートII、パートIIIの3つのコンポーネントが揃っているかどうかを確認し、対応する保管温度ですぐに保管してください。

注意事項

1. ご使用前に取扱説明書をよくお読みになり、取扱説明書に厳密に従って操作してください。サンプル処理はクリーンベンチまたは生物学的安全キャビネット内で行うことを推奨します。

2. 室温で保管した溶液に沈殿物や濁りがないかどうか注意してください（特に冬場など室温が低い場合）。使用効果に影響を与えないように、溶液が透明になるまで 37°C の湯浴をかけてください。

3. 溶出中に磁性ビーズが残留する可能性があるため、サンプルを採取する際には磁性ビーズを吸引しないようにしてください。

4. 本製品を使用する際は、交差汚染を避けるため、チップを頻繁に交換してください。

5. 安全と健康のため、本製品を操作する際には、実験着や使い捨て手袋などの個人用保護具 (PPE) を着用してください。

6. この製品は研究目的にのみご使用ください。

事前準備

1. 自分で用意する機器：ボルテックスシェーカー、ウォーターバスまたはメタルバス、遠心分離機、磁気分離ラック、杭州 Aosheng Auto-Pure32A 自動核酸抽出装置、またはその他のブランドの全自動核酸抽出装置。

2. 消耗品（ご自身でご用意ください）：10μL～1000μL低吸着フィルターチップ、1.5 mL低吸着遠心チューブ、PCRチューブまたは96ウェルプレート、および対応するチューブキャップまたはメンブレン。

3. 自家調製試薬：無水エタノール（分析グレード）、1×PBS緩衝液（pH 7.4、MgおよびCaイオンを含まない）、超純水。

4. 初めて使用する際は、ラベルまたは説明書に記載されている量の無水エタノールを洗浄液A*と洗浄液B*のボトルに加え、使用前によく混ぜ、ボトルに印を付けてください。使用後はボトルのキャップをしっかりと閉め、ボトル内のエタノール濃度を維持してください。

手動残留DNA抽出

1. サンプル処理

1.1 サンプルにワクチンなどの比較的高い DNA 含有量が含まれる場合は、1×PBS 緩衝液 (pH 7.4、Mg イオンおよび Ca イオンを含まない) で適切な割合に希釈してから抽出してください (サンプルの希釈は、検出値が標準曲線の直線範囲内になるようにし、検出の精度を確保するためです。通常は 100 倍希釈が考えられます)。

1.2 試験するサンプルが乾燥粉末の場合は、使用前に超純水で 10 mg/mL または 100 mg/mL に希釈してください。

1.3 サンプルに複雑なマトリックスが含まれている場合は、適切な希釈率を決定するために標準添加および回収実験を実行する必要があります。

2. 100 μL のサンプルを 1.5 mL チューブに加え、100 μL の溶解バッファー、10 μL のプロテアーゼ K を加えてボルテックスし、10 秒間混ぜます。

[注記]：タンパク質サンプルの濃度が0～100 mg/mLの場合は10μLのプロテアーゼKを加え、タンパク質サンプルの濃度が100～200 mg/mLの場合は20μLのプロテアーゼKを加えます。

3. 60℃で20分間インキュベートします。

4. 次に、結合溶液 400 μL、グリコーゲン 9 μL、ポリ A カリウム塩 6 μL を加え、ボルテックスしてよく混ぜます。

5. 磁気ビーズ20μLを加え、ボルテックスでよく混ぜ、10分間放置します。3分ごとに10秒間ボルテックスで混ぜてください。

【注意事項】：磁気ビーズは使用前にボルテックスでよく撹拌し、完全に再懸濁させてください。サンプルを4～5回に分けて添加した後、再度混合することをお勧めします。

7. 軽く遠心分離して溶液を沈殿させ、遠心管を磁気ラックに1～2分間置きます。磁気ビーズが完全に吸収されたら、液体を慎重に取り除きます。

8. 洗浄液A 500μLを加え（使用前に無水エタノールが添加されているかどうかを確認してください）、振るかボルテックスで混合して、磁性ビーズが分散し、遠心管の壁に磁性ビーズが凝集していないことを確認します。

9. 軽く遠心分離し、遠心管を磁気ラックに1～2分間置きます。磁気ビーズが完全に吸収されたら、液体を慎重に取り除きます。

10. 洗浄液B 500μLを加え（使用前に無水エタノールが添加されているかどうかを確認してください）、振るかボルテックスで混合して、磁性ビーズが分散し、遠心管の壁に磁性ビーズが凝集していないことを確認します。

11. 軽く遠心分離し、遠心管を磁気ラックに1～2分間置きます。磁気ビーズが完全に吸収されたら、液体を慎重に取り除きます。

12. 残留液が可能な限り除去されるように、チューブを 10 秒間素早く遠心分離し、磁気ラックに置き、10 μL ピペットを使用して残留液を吸引します。

13. チューブのキャップを開け、エタノールが完全に蒸発するまで室温で3分間放置します。磁性ビーズの表面に反射やひび割れが現れなければ、エタノールが完全に蒸発したことがわかります。

14. チューブをマグネットスタンドから取り出し、65℃に予熱した溶出液50～100μLを加え、よく振盪混合する。その後、軽く遠心分離し、65℃で5分間インキュベートする。2～3分ごとに振盪混合する。

15. 再度軽く遠心分離し、遠心管を磁気スタンドに2分間置きます。磁気ビーズが完全に吸着したら、DNA溶液を新しい遠心管に慎重に移し、-20℃で保存します。長期保存の場合は-80℃で保存します。