説明
Hifair ™ Advanced One Step RT-qPCR Kit は、SYBR Green I 色素をベースにした蛍光定量キットです。遺伝子特異的プライマーを使用して、逆転写と qPCR 反応が 1 本のチューブで完了するため、キャップを開けたりピペッティングしたりする操作を繰り返す必要がなくなり、アッセイ効率が大幅に向上し、コンタミネーションのリスクが軽減されます。RNA サンプルの場合、このキットは効率的な cDNA 合成のために耐熱性の Hifair ™ V 逆転写酵素を使用し、定量増幅のために UNICON ™ HotStart Taq DNA ポリメラーゼを採用しています。最適化されたバッファー システムでは、キットの感度は、高度に発現したターゲットでは 0.1 pg、中程度に発現したターゲットでは 1 pg まで達することができ、DNA サンプルの増幅と定量にも適しています。このキットは DNA サンプルの増幅と定量に適しており、さまざまな植物や動物のサンプル、細胞、微生物からの核酸を高感度に検出し、定量することができます。
仕様
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カタログ番号 |
11175ES20 / 11175ES70 |
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サイズ |
20トン/200トン |
コンポーネント
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コンポーネント番号 |
名前 |
11175ES20 |
11175ES70 |
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11175-A |
2×Hifair ™アドバンスSGバッファー |
250μL |
2×1.25mL |
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11175-B |
Hifair ™アドバンス UH 酵素ミックス |
20μL |
200μL |
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11175-C |
RNaseフリーH 2 O |
250μL |
2×1.25mL |
ストレージ
この製品は-25～-15℃で保管してください。 光から離れて 1年。
説明書
- 反応 システム 構成*****
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コンポーネント |
容量（μL）**** |
容量（μL） |
最終濃度 |
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2×Hifair ™アドバンスSGバッファー* |
12.5 |
25 |
1× |
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Hifair ™アドバンス UH 酵素ミックス |
1 |
2 |
- |
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フォワードプライマー（10 μmol/L）** |
0.5 |
1 |
0.2μmol/L |
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リバースプライマー（10 μmol/L）** |
0.5 |
1 |
0.2μmol/L |
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RNA*** |
X |
X |
- |
|
RNaseフリーH 2 O |
25まで |
50まで |
- |
* 低RoxモデルおよびRox補正なしモデルは、上記の反応系に従って直接調製します。高Roxモデルを使用する場合は、Hieff™ SP High Roxを2×Hifair™ Advanced SG Bufferに1:250 v/vで加え、よく混合してから遠心分離してください。Hieff™ SP High Roxを添加した2×Hifair ™ Advanced SG Bufferは、低RoxモデルおよびRox補正なしモデルの使用に影響を与えません。
** 最終的なプライマー濃度は 0.2 μmol/L でしたが、必要に応じて 0.1 ～ 1 μmol/L の間で調整することもできます。
*** この試薬は非常に感度が高く、Total RNA は 1 pg ～ 1 μg の範囲で検出されます。また、ヒトサンプルのテストでは、全体的な Ct 値が 15 ～ 30 の範囲になるように適切に制御し、1 pg ～ 100 ng が最適な入力であることが示されました。
**** 標的遺伝子増幅の妥当性と再現性を確保するため、20 μL または 50 μL の使用をお勧めします。
***** ウルトラクリーンベンチ内で調製し、ヌクレアーゼ残留物を含まないチップと反応チューブを使用してください。フィルターカートリッジ付きのチップを推奨します。クロスコンタミネーションおよびエアロゾルコンタミネーションを避けてください。
2）反応プログラム
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サイクルステップ |
温度。 |
時間 |
サイクル |
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逆転写 |
50℃* |
6分 |
1 |
|
初期変性 |
95℃ |
5分 |
1 |
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増幅反応 |
95℃ |
15秒 |
40 |
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60℃** |
30秒 |
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融解曲線段階 |
機器のデフォルト |
1 |
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*逆転写温度は、実験のニーズに応じて50～55℃の範囲で選択できます。DNAサンプルの場合は、逆転写プロセスを省略できます。
** 特別な場合、アニーリング/伸長温度はプライマーの Tm 値に応じて調整できますが、60°C が推奨されます。
3）適用機種
Rox キャリブレーションを必要としない機器モデル:
Bio-Rad: CFX96、CFX384、iCycler iQ、iQ5、MyiQ、MiniOpticon、Opticon、Opticon 2、Chromo4;
エッペンドルフ：Mastercycler ep realplex、realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q、Rotor-Gene 3000、Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480、LightCycler2.0、LightCycler 96;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler、Cepheid: SmartCycler、Illumina: Eco qPCR、
Low Rox 適用モデル:
ABI 7500、7500 Fast、ViiA7、QuantStudio 3 および 5、QuantStudio 6、7、12k フレックス。
ストラタジェン MX3000P、MX3005P、MX4000P;
High Rox適用モデル*:
ABI 5700、7000、7300、7700、7900HT Fast、StepOne、StepOne Plus。
* High Roxモデルの場合、Hieff™ SP High RoxはHifair ™の2倍の量に比例して追加する必要があることに注意してください。 使用前にAdvanced SG Bufferを使用してください。
注記
- この製品は研究用途にのみご使用いただけます。
- 安全のため、白衣と使い捨て手袋を着用して作業してください。
文書:
安全データシート
マニュアル
支払いとセキュリティ
お支払い情報は安全に処理されます。 クレジットカードの詳細を保存したり、クレジットカード情報にアクセスすることはありません
問い合わせ
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よくある質問
この製品は研究目的のみに使用され、人間や動物の治療や診断に使用することを意図したものではありません。製品とコンテンツは、
特定のアプリケーションでは、追加のサードパーティの知的財産権が必要になる場合があります。