شرح
Hifair™ Super Reverse Transcriptase یک ترانس کریپتاز معکوس نسل بعدی است، که بود enژینر شده از M-MLV. این آنزیم فاقد فعالیت RNase H است و پایداری حرارتی قابل توجهی بهبود یافته است و دمای واکنش تا 70 درجه سانتیگراد را تحمل می کند. برای رونویسی معکوس کارآمد الگوهای RNA با ساختارهای ثانویه پیچیده بسیار مناسب است.
برنامه های کاربردی
این محصول برای آزمایش های سنتز RT-PCR، RT-qPCR، RT-LAMP، RNA-seq و cDNA مناسب است. دمای واکنش رونویسی معکوس می تواند تا 70 درجه سانتی گراد برسد.
تعریف واحد
یک واحد (U) از فعالیت آنزیم به عنوان مقدار آنزیم مورد نیاز برای ترکیب 1 نانومول dTTP در مواد نامحلول در اسید در عرض 10 دقیقه در دمای 37 درجه سانتی گراد، با استفاده از Poly(A).Oligo(dT) به عنوان پرایمر تعریف می شود.
جزء
| جزء | نام | 14612ES92 | 14612ES93 |
| 14612 | Hifair™ سوپر معکوس ترانس کریپتاز (200 U/μL) | 50 میکرولیتر | 250 میکرولیتر |
شرایط نگهداری
حداکثر تا 18 ماه در دمای 25- تا 15- درجه سانتی گراد نگهداری شود.
دستورالعمل استفاده
روش سنتز cDNA رشته اول
1. دناتوراسیون RNA (مرحله اختیاری)
1. دناتوره شدن RNA به باز کردن ساختارهای ثانویه کمک می کند و به طور قابل توجهی بازده cDNA رشته اول را بهبود می بخشد.
| جزء | حجم |
| ddH2O بدون RNase | تا 13 میکرولیتر |
| اولیگو(dT)18 (50 میکرومولار) یا پرایمرهای تصادفی (50 میکرومولار) یا پرایمرهای اختصاصی ژن (2 میکرومولار) | 1 میکرولیتر |
| الگوی RNA | RNA کل: 10 pg - 5 میکروگرم یا mRNA: 10 pg - 500 نانوگرم |
· به مدت 5 دقیقه در دمای 65 درجه سانتیگراد حرارت دهید، سپس به سرعت به مدت 2 دقیقه روی یخ قرار دهید.
· به طور خلاصه سانتریفیوژ کنید تا مایع واکنش جمع آوری شود و مخلوط واکنش رونویسی معکوس مطابق شکل زیر اضافه شود.
2. تنظیم واکنش رونویسی معکوس (سیستم 20 میکرولیتری)
| جزء | حجم |
| مخلوط واکنش از مرحله قبل | 13 میکرولیتر |
| 5× بافر واکنش | 4 میکرولیتر |
| مخلوط dNTP (10 میلی‌مولار) | 1 میکرولیتر |
| Hifair® Super Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 1 میکرولیتر |
| مهارکننده RNase (40 U/μL) | 1 میکرولیتر |
3. تنظیمات برنامه رونویسی معکوس
| دما | زمان |
| 25 درجه سانتی گراد* | 5 دقیقه |
| 50-70 درجه سانتی گراد | 15-30 دقیقه |
| 85 درجه سانتیگراد ** | 5 دقیقه |
*هنگام استفاده از پرایمرهای تصادفی، به مدت 5 دقیقه در دمای 25 درجه سانتیگراد انکوبه کنید. در صورت استفاده از اولیگو(dT)18 یا پرایمرهای اختصاصی ژن، این مرحله را می توان حذف کرد.
گرمایش 85 درجه سانتیگراد به مدت 5 دقیقه ترانس کریپتاز معکوس را غیرفعال می کند و در صورت نیاز قابل تنظیم است.
محصول رونویسی معکوس را می توان بلافاصله برای واکنش های بعدی PCR یا qPCR، ذخیره کوتاه مدت در -20 درجه سانتیگراد یا برای نگهداری طولانی مدت در 80- درجه سانتیگراد پس از تفکیک برای جلوگیری از چرخه های انجماد و ذوب استفاده کرد.
موارد احتیاط
1. حفظ محیط آزمایشگاهی تمیز؛ دستکش و ماسک تمیز بپوشید اطمینان حاصل کنید که تمام مواد مصرفی آزمایشی فاقد RNase هستند تا از آلودگی جلوگیری شود.
2. تمام عملیات را روی یخ انجام دهید تا از تجزیه RNA جلوگیری شود.
3. از نمونه های RNA با کیفیت بالا برای اطمینان از رونویسی معکوس کارآمد استفاده کنید.
4. این محصول فقط برای استفاده تحقیقاتی است.
5. برای ایمنی و سلامتی خود، هنگام کار با محصول، از کت آزمایشگاه و دستکش یکبار مصرف استفاده کنید.
اسناد:
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.