최근 분자생물학 기술의 급속한 발전으로 핵산 기반 진단법이 널리 확립되어 인간 질병의 실험실 검사에 널리 적용되고 있습니다. 등온 증폭법은 다른 핵산 증폭법과 비교하여 빠르고 효율적이며 특이적인 장점을 제공하며, 특수 장비가 필요하지 않습니다. 따라서 등온 증폭법은 등장 이후 많은 학자들에게 PCR에 필적할 만한 검출법으로 여겨져 왔습니다.
그 결과, 등온 증폭 기술을 기반으로 한 진단 기구 및 키트의 개발과 응용은 분자 진단 분야에서 현장진단(POCT)의 새로운 방향을 제시할 것으로 믿어집니다.
주류 등온 증폭 기술의 원리 소개
1. 루프 매개 등온 증폭(LAMP) 기술
원리: 루프 매개 등온 증폭(LAMP)은 가닥 치환 활성을 가진 Bst DNA 중합효소를 이용합니다. 표적 유전자의 6개 영역을 표적으로 하는 4가지 유형의 특이적 프라이머를 설계하여 등온 조건에서 표적 서열을 효율적이고 신속하며 특이적으로 증폭합니다. 증폭은 60~65°C의 일정한 온도에서 수행될 수 있으며, 15~60분 이내에 10 ^9 ~10^ 10 배의 핵산 증폭을 달성할 수 있습니다.
장점 및 응용 분야: 등온 증폭법 은 빠른 반응, 높은 특이성, 간단하고 조작하기 쉬운 장비, 그리고 해석하기 쉬운 결과를 특징으로 하여 병원성 박테리아, 기생충, 바이러스, 질병 및 유전자 변형 제품 의 검출에 적용되어 왔습니다. 또한 임상 감염성 질환 진단, 환경 모니터링, 식품 안전 및 기타 분야에서도 널리 사용될 것으로 예상됩니다. 분자 현장진단( POCT ) 플랫폼에 적합한 이상적인 방법으로 자리매김했습니다.
분류： LAMP 검출 방법은 탁도법, pH 지시약법, 형광염료법(NHB, 칼세인, SYBR Green, Syto 등), 형광탐침법 등 여러 유형으로 분류됩니다.
2. 재조합 중합효소 증폭(RPA) 기술
원리: 재조합효소는 프라이머에 결합하면 단백질-DNA 복합체를 형성하여 이중 가닥 DNA 내에서 상동 서열을 탐색합니다. 프라이머가 상동 서열을 찾으면 가닥 교환 반응이 발생하여 DNA 합성이 시작되고 개시되며, 이는 주형의 표적 영역을 기하급수적으로 증폭시킵니다. 치환된 DNA 가닥은 단일 가닥 결합(SSB) 단백질에 결합하여 추가 치환을 방지합니다. 이 시스템에서는 재조합효소, Bsu 효소, 그리고 SSB 단백질의 활성에 의존하는 두 개의 상반되는 프라이머에 의해 합성이 시작됩니다. 이 기술은 37~42°C의 온도 범위에서 10~30분 이내에 관심 표적을 신속하게 검출할 수 있습니다.
장점 및 응용 분야: RPA는 높은 민감도, 강력한 특이성, 낮은 전문 장비 의존도 , 그리고 다양한 검출 형식 통합 기능을 자랑합니다. 특히 기초 단계 및 현장 환경에서의 현장 진단(Point-of-Care) 검사에 적합합니다. RPA는 체외 진단, 동물 질병, 식품 안전, 생물 안전, 농업 및 기타 분야에 광범위하게 적용될 수 있습니다.
분류： RPA 검출 방법은 겔 전기영동, EXO 프로브 방법, Fpg 프로브 방법, 측면 흐름 딥스틱(LF-RPA), 응집 분석 등을 포함하여 여러 유형으로 분류됩니다.
제품 성능
1. RT-LAMP pH 민감 염료 시약
pH 민감성 염료 RT-LAMP는 60~65℃의 등온 조건에서 시각적 염료를 민감성 지표로 사용하여 항온 수조 또는 표준 PCR 장비를 사용하여 1단계 RNA 핵산 증폭을 완료합니다. 단 30분 만에 반응 후 색상 변화를 통해 병원균 감염 여부를 확인할 수 있으며, 더욱 직관적인 결과(양성 반응은 주황색, 음성 반응은 자홍색)를 얻을 수 있습니다. 이 방법은 대규모 집단의 신속한 검사에 적합합니다.
추천 상품：
RT-LAMP pH 민감 염료 키트(13906ES)
RT-LAMP pH 민감 염료 발색 버전 동결 건조 가능 키트(13920ES)
성능:
2. RT-LAMP 형광염료 시약
형광염료법(RT-LAMP)은 형광염료(SYBR Green, Syto 등)를 형광 마커로 사용합니다. 증폭 반응 중 이중 가닥 DNA에 결합하면 형광 신호가 800~1000배 증폭됩니다. 형광 정량 PCR 장비를 사용하여 60~65℃의 등온 조건에서 검사를 실시하고, 약 30분 후 증폭 결과를 이용하여 병원균 감염 여부를 확인할 수 있습니다. 이 방법은 미세유체 칩이나 휴대용 검출기와 함께 사용하여 신속한 검사를 수행할 수도 있습니다.
추천 상품：
RT-LAMP 염료 분석 키트(UDGplus)(13762ES)
성능:
제품 선택 가이드
1. RT-LAMP/RPA 혼합 선택 가이드
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제품 분류 |
RT-LAMP 믹스 |
RPA 믹스 |
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제품명 |
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제품 품목 번호 |
13762ES |
16702ES |
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제품 카테고리 |
형광염료 |
조사 |
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제품 구성 요소 |
2개의 구성 요소 완충액、효소 혼합물 |
4가지 구성 요소 완충액、효소 혼합물、아세트산 마그네슘 |
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동결건조 지원 |
아니요 |
아니요 |
2.LAMP/RT-LAMP 효소 선택 가이드
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제품 분류 |
Bst 효소 |
역전사효소 |
UDG 효소 |
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제품명 |
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제품 품목 번호 |
14402ES |
14405ES |
11111ES |
14455ES |
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효소 활성 |
40 U/μL |
60 U/μL |
200 U/μL |
1 U/μL |
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제품 구성 요소 |
3가지 구성 요소 |
2개의 구성 요소 |
2개의 구성 요소 |
하나의- 요소 |
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동결건조 지원 |
아니요 |
예 |
아니요 |
아니요 |
3、RPA 효소 선택 가이드
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제품 분류 |
T4 X |
T4 Y |
SSB |
엑소 |
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제품명 |
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제품 품목 번호 |
11079ES |
11080ES |
11081ES |
14525ES |
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효소 활성 |
2μg/μL |
2μg/μL |
5μg/μL |
100 U/μL |
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제품 구성 요소 |
단일 성분 |
단일 성분 |
단일 성분 |
2개의 구성 요소 |
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동결건조 지원 |
아니요 |
아니요 |
아니요 |
아니요 |