등온 핵산 증폭 기술은 다양한 증폭 원리에 따라 여러 유형으로 분류될 수 있습니다. 가장 일반적이고 널리 적용되는 방법은 2000년 노토미(Notomi)를 비롯한 일본 학자들이 개발한 루프 매개 등온 증폭(LAMP, Loop-Mediated Isothermal Amplification) 기술입니다. LAMP의 기술적 특징은 표적 유전자의 6개 영역을 표적으로 하는 4개의 프라이머를 설계하고, 가닥 치환형 Bst DNA 중합효소를 이용하여 60~65°C의 일정 온도에서 증폭 반응을 진행하는 것입니다. 이를 통해 15~60분 이내에 10 배 에서 10 배의 증폭을 달성할 수 있습니다.
Bst DNA 중합효소는 LAMP 등온 증폭 기술의 핵심 효소입니다. Bst DNA 중합효소는 강력한 열 안정성, 가닥 치환 활성, 그리고 중합효소 활성을 가지고 있어 일정한 온도 조건에서 주형의 빠르고 효율적이며 특이적인 증폭을 가능하게 합니다. 증폭을 위해 열 변성 사이클이 필요한 PCR과 달리, LAMP 실험은 이러한 사이클 없이도 한 시간 안에 전체 실험을 완료할 수 있습니다.
제품의 장점
글리세롤이 없는 효소, 동결건조에 적합
주변 온도 운송으로 비용 절감
강력한 스트랜드 변위 활성, 민감하고 안정적
빠른 재수화, 간편한 조작
성과 하이라이트
01 형광염료법 응용
1. 민감도가 높고 특이도가 좋음
RT-LAMP 형광 염료 증폭 시스템에서 동결건조 분말 케이크 14405ES의 증폭 성능은 액상 Bst 효소(글리세롤 및 글리세롤 무함유 포함)의 증폭 성능과 일치하며, 두 효소 모두 50copy/T의 감도에서 100% 검출할 수 있습니다. 특이도는 우수하며, NTC(음성 템플릿 대조군) 48웰에서는 검출되지 않았습니다.

2. 우수한 열 가속 안정성
RT-LAMP 형광 염료 증폭 시스템에서 동결건조 분말을 45°C에서 각각 7일, 45°C에서 15일, 그리고 실온에서 19일 동안 보관하였다. 열 가속 후, 제품 성능은 글리세롤이 없는 액상 Bst 효소와 동일한 수준을 유지하였으며, NTC(음성 주형 대조군)에서 피크가 관찰되지 않았다.
3、가속 후 재동결 지원
RT-LAMP 형광 염료 증폭 시스템에서 동결건조된 분말을 각각 45°C에서 7일 및 45°C에서 15일 동안 보관 처리했습니다. 열 가속 처리 후 동결건조된 분말을 단일 효소 및 RT-LAMP 시약 사용 후 2차 동결건조를 진행했습니다. 실험 결과, 가속 처리 및 2차 동결건조 후에도 제품 성능은 글리세롤 무함유 Bst 효소 액상 버전과 동일하게 유지되었으며, NTC(음성 주형 대조군)에서 피크가 관찰되지 않았습니다. 제품의 안정성이 우수하여 2차 동결건조 및 2차 동결건조 후 가속 건조를 지원할 수 있습니다.
02 pH 비색법 응용
1. 민감도가 높고 특이도가 좋음
RT-LAMP pH 비색 증폭 시스템에서 동결건조 분말 케이크 14405ES의 증폭 감도는 50개/T(검출률 100%)에 도달할 수 있으며 특이성은 우수하며 NTC(음성 템플릿 대조군) 24개 웰에서는 검출되지 않았습니다.
2. 우수한 열 가속 안정성
RT-LAMP pH 비색 증폭 시스템에서 동결건조 분말 14405ES의 열 가속 안정성을 45°C에서 15일간, 가속 후 2차 동결건조(45°C에서 7일간 가속 후 재수화) 후 안정성, 그리고 재수화 후 저장 안정성(재수화 후 -20°C에서 7일간 보관)을 조사했습니다. 실험 결과, 14405ES 제품은 열 가속 후 제품 성능에 영향을 미치지 않는 우수한 안정성을 보이며, 가속 후 2차 동결건조에도 적용 가능한 것으로 나타났습니다.
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제품 유형 |
제품 기능 |
제품명 |
품목 번호 |
RT-LAMP 믹스 |
형광염료 |
13762ES |
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pH 지시약 |
RT-LAMP pH 민감 염료 키트 |
13906ES |
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동결건조 가능한 pH 지시약 |
RT-LAMP pH 민감 염료 발색 버전 동결 건조 가능 키트 |
13920ES |
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Bst 효소 |
글리세린 |
14402ES |
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글리세롤 무첨가 |
14405ES |
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완충기 |
기본 완충액(염료 등이 포함되지 않음) |
10× Hieff™ Bst Plus DNA 중합효소 완충액 |
15441ES |