説明
ハイフ™ 多用途性T4 DNAリガーゼは、T4 DNAリガーゼのバリアントです。この酵素は、粘着末端または平滑末端分子間のライゲーション反応を触媒するのに適しています。次世代シーケンシング（NGS）におけるライブラリ調製プロセスにおいて、DNA断片とアダプターを連結するために設計された単酵素製品です。Hieff® Versatility T4 DNA リガーゼは、ハイスループット シーケンシングを通じて広範囲に検証されており、優れた品質を示します。
特徴
- 高忠実度
- 耐熱性
仕様
| ソース | 組み換え大腸菌 |
| ストレージバッファ | 50 ミリメートル トリス塩酸塩1,100 mM KC1,0.1 mM EDTA、1 mM DTT、50%グリセロール、pH 7.5士0.2 @25℃ |
| ユニット定義 | 20μLのライゲーション反応系において、6μgのλDNA-Hind IIIを16℃で30分間反応させたときに、50%以上のDNA断片のライゲーションを触媒するのに必要な酵素量を1活性単位（U）と定義する。 |
コンポーネント
| コンポーネント | 名前 |
12996ES60 60KU |
12996ES62 600KU |
| 12996-A | ハイフ® 多用途T4 DNAリガーゼ（600 U/µL） | 100μL | 1000μL |
| 12996-B | 10×T4 DNAリガーゼバッファー | 500μL | 3×1500μL |
ストレージ
この製品は-25～-15℃で2年間保管してください。 年。
形
注記
1.安全のため、白衣と使い捨て手袋を着用して作業してください。
2.緩衝液中に少量の沈殿物が生じる場合がありますが、これは正常な現象です。使用前に緩衝液を転倒混和し、よく混合してください。
3.この製品は研究用途のみです。
プロトコル
1.現在主流となっているライゲーション法を用いたDNAライブラリー調製キットは、通常、末端修復およびA-テーリング後の精製工程を必要としません。DNA断片は精製することなく、直接アダプターライゲーションにかけられます。本キットは、主流のライゲーション法と互換性があります。 シームレスなアダプターライゲーション用の市販の末端修復および A テーリング システム。
氷上のマイクロ遠心管に次の反応液をセットし、ピペッティングまたは振盪により穏やかに混合し、軽く遠心分離し、20°C で 15 分間加熱不活化します。
表1. アダプターライゲーション反応系
|
成分 |
容量（ μL ） |
最終濃度 |
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dA末端DNA |
60 |
1× |
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10×T4 DNAリガーゼバッファー |
10 |
0.1 μM-0.5 μM |
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50% PEG6000 |
12* |
1 ng -400 ng |
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DNAアダプター |
5** |
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3～5*** |
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|
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ヌクレアーゼフリー水 |
上 100まで |
- |
【注意】 *50% PEG6000溶液はキットに含まれていませんので、ご自身でご用意ください。
**表を参照してください 2 のために アダプタの量。
***T4 DNA リガーゼの量は必要に応じて 3 ～ 5 μL ずつ追加できます。
2.アダプターの濃度はライゲーション効率とライブラリー収量に直接影響します。アダプターを過剰に使用すると、 で アダプターダイマーは増加するが、使用率が低いと接続効率とライブラリー生成に影響が出る可能性がある。表2 入力 DNA の量に応じて推奨されるアダプターの量をリストします。
表2. 100 pg-1 μgの入力DNAに対する推奨アダプター量
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入力DNA |
集中 |
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0.1 ング |
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1 ng |
0.5μM |
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10 ng |
1μM |
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25 ng |
2μM |
|
100 ng～1000 ng |
10μM |
【注意】：アダプターの量は 上記の表の要件に応じて調整できます。
支払いとセキュリティ
お支払い情報は安全に処理されます。 クレジットカードの詳細を保存したり、クレジットカード情報にアクセスすることはありません
問い合わせ
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よくある質問
この製品は研究目的のみに使用され、人間や動物の治療や診断に使用することを意図したものではありません。製品とコンテンツは、
特定のアプリケーションでは、追加のサードパーティの知的財産権が必要になる場合があります。