آلودگی آئروسل در محیط عملیاتی به عنوان شایع ترین علت مثبت کاذب در PCR نتایج: کشف پیشگام اوراسیل DNA گلیکوزیلاز (UDG) توسط دانشمند آمریکایی Lindahl در E. coli و Bacillus subtilis، و ایجاد یک سیستم PCR با استفاده از EnterGDmin. dUTP.
آنزیم‌های UDG موجود در بازار عمدتاً از دو نوع تشکیل شده‌اند: آنزیم‌های UDG معمولی مشتق شده از اشریشیا کلی و باسیلوس سوبتیلیس و آنزیم‌های گرما پایدار UDG که از باکتری‌های دریایی روان‌دوست منبع می‌شوند. آنزیم‌های معمولی UDG مقاومت حرارتی بیشتری نشان می‌دهند و مقدار کمی از فعالیت گلیکوزیلاز اوراسیل-DNA را حتی پس از درمان در دمای 95 درجه سانتی‌گراد به مدت 10 دقیقه حفظ می‌کنند، که ممکن است منجر به تخریب محصولات تقویت هدف حاوی dU شود. علاوه بر این، به دلیل استفاده از سویه های باکتریایی مهندسی شده (مانند E. coli) برای بیان نوترکیب آنزیم های مولکولی، مقدار معینی از DNA ژنومی میزبان باقیمانده در این آنزیم ها وجود دارد. همراه با تأثیرات محیط تولید و منابع انسانی، محصولات آنزیمی مولکولی بسیار حساس به آلودگی DNA هستند. در طول تشخیص پاتوژن‌ها، DNA آلوده ممکن است اسیدهای نوکلئیک هدف با فراوانی کم را بپوشاند یا در کنار آنها شناسایی شود و در نتیجه بر تفسیر نتایج تأثیر بگذارد.
Yeasen UCF.ME Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG)، حساس به حرارت
توضیحات
UCF.ME Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG)، حساس به حرارت، 1 U/μL (Cat#14466ES) این آنزیم که از باکتری های روان دوست دریایی مشتق شده است، یک آنزیم UDG حساس به حرارت باقیمانده بسیار کم است که به نام UCF.ME شناخته می شود. استفاده از این محصول می تواند از فعالیت باقیمانده آنزیم های UDG معمولی پس از غیرفعال شدن از تجزیه محصولات تقویتی حاوی dU در دمای اتاق جلوگیری کند. همچنین از ایجاد نتایج مثبت کاذب در نتایج PCR، باکتری های پس زمینه موجود در آنزیم های مولکولی جلوگیری می کند. بنابراین، معرفی آنزیم UCF.ME® UCF.ME برای شناسایی دقیق پاتوژن‌های عفونی و کمک به تشخیص بالینی عفونت‌ها و بیماری‌های عفونی بسیار مهم است.
مزایای محصول
- باقیمانده بسیار کم UCF.ME-E. coli باقیمانده DNA ژنومی <0.1 کپی/U;
- باقیمانده نوکلئاز کم - بدون اگزونوکلئاز باقیمانده، آنزیم نیکون یا RNase.
- قابلیت هضم قوی - 0.05 U/T می تواند 105 کپی/T محصول dU-DNA را هضم کند.
- حرارت پذیری خوب - غیرفعال سازی کامل در هر شرایط 50 درجه سانتی گراد به مدت 10 دقیقه، 55 درجه سانتی گراد به مدت 5 دقیقه یا 95 درجه سانتی گراد به مدت 5 دقیقه.
- سازگار با سیستم های واکنش RT-qPCR - بدون تاثیر بر سیستم تشخیص حتی در سطوح ورودی بالا (سیستم واکنش 2U/20μL).
(1) خلوص پروتئین≥95%
شکل 1. نتایج تشخیص خلوص پروتئین (SDS-PAGE).
(2) هسته‌های باقیمانده کم: بدون اگزونوکلئازهای باقیمانده، آنزیم‌های نیکون یا RNases
شکل 2. نتایج آزمایش باقیمانده هسته
(3) E. باقیمانده DNA ژنومی coli < 0.1 کپی / U، سطح باقیمانده به طور قابل توجهی کمتر از معرف معمولی بود.
شکل 3. نتایج آزمایش باقیمانده DNA ژنومی E.coli
شکل 4. در مجموع 0.05 واحد از آنزیم UDG می تواند 10^5 کپی/T dU-DNA را به طور کامل هضم کند.
شکل 5. پس از 50 ℃، 10 دقیقه، 55 ℃، 5 دقیقه، 55 ℃، 10 دقیقه، 95 ℃، 5 دقیقه درمان غیر فعال سازی حرارتی، 14466ES توانایی هضم را از دست داد.
شکل 6. مخلوط RT-qPCR با استفاده از دو پروب آغازگر ژن ORF1ab و N و 14466ES تهیه شد. هنگامی که 14466ES به مقدار 2U/20μL به سیستم واکنش تزریق شد، هیچ مهاری از RT-qPCR وجود نداشت. واکنش
توصیه محصول - سری مواد خام آنزیم PCR باقیمانده بسیار کم
| موقعیت یابی محصول | نام محصول | گربه |
| آلودگی-جلوگیری از UDG حساس به حرارت | UCF.ME Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG)، حساس به حرارت، 1 U/μL | 14466ES |
| شروع داغ Taq DNA Polymerase | Hieff UCF.ME Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 14314ES |
| ترانس کریپتاز معکوس | Hifair UCF.ME V رونوشت معکوس (200 U/μL) | 14608ES |
| مهارکننده RNase موشی | 14672ES |