{"product_id":"92678","title":"Mouse Treg Polarization Kit _ 92678ES","description":"\u003cp\u003eRegulatory T cells (Treg) are a central CD4⁺ T cell subset that maintains immune tolerance and suppresses excessive inflammatory responses, and they are essential for research on autoimmunity, transplant immunology, tumor immunity, and inflammatory regulation. The Mouse Treg Polarization Kit is designed for the in vitro directed induction of mouse naive CD4⁺ T cells, providing a standardized polarization system for the efficient, stable, and reproducible generation of high-purity functional iTreg cells.\u003c\/p\u003e\n\u003ch3\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eProduct Components\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003ctable class=\"MsoNormalTable\" border=\"0\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eCat. No.\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eComponent Name\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eAppearance\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eRecommended Working Concentration\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e92678ES10 (10 mL System)\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e92678ES60 (100 mL System)\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e92678ES-A\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eMouse IL-2 Protein\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eLyophilized Powder\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e10 ng\/mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e5 μg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e5 μg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e92678ES-B\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eMouse TGF-β1 Protein\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eLyophilized Powder\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e2 ng\/mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e5 μg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e5 μg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e92678ES-C\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eAnti-mouse CD3ε mAb\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eLiquid\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e10 μg\/mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e100 μg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e1 mg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"138\" 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valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e200 μg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e92678ES-E\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eAnti-mouse IL-4 Recombinant mAb\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eLiquid\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e10 μg\/mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e100 μg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e1 mg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e92678ES-F\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eAnti-mouse IFN-γ Recombinant mAb\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eLiquid\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e10 μg\/mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e100 μg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e1 mg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e92678ES-G\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003eβ-Mercaptoethanol (14.3 M)\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eLiquid\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e55 μM\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e100 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e100 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003ch3 class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eTreg Polarization Induction Protocol for CD4⁺ T Cells:\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e1. Coat Anti-CD3ε\/CD28 Antibodies for T Cell Activation\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1.1 Dilute anti-mouse CD3ε and anti-mouse CD28 monoclonal antibodies to the working concentrations (10 μg\/mL and 2 μg\/mL, respectively) using sterile PBS.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1.2 Add 500 μL of the antibody mixture to each well of a 48-well cell culture plate, ensuring the liquid covers the well bottom.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1.3 Incubate the plate at 4°C for overnight coating (approximately 16-18 hours).\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e2. Seed Cells and Initiate Treg Polarization\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2.1 The next day, aspirate the coating solution and gently wash the plate twice with pre-chilled sterile PBS to remove unbound antibodies.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2.2 Resuspend mouse splenic CD4⁺ T cells (purity \u0026gt;95%) isolated using a CD4⁺ T Cell Isolation Reagent (Cat. No. 37607ES10) in complete Treg polarization medium at a density of 4-5×10⁵ cells\/mL.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eComplete Treg polarization medium: RPMI-1640 basal medium supplemented with 10% FBS, 55 μM β-mercaptoethanol, 10 ng\/mL recombinant mouse IL-2, 2 ng\/mL recombinant mouse TGF-β1, 10 μg\/mL anti-mouse IFN-γ functional antibody, and 10 μg\/mL anti-mouse IL-4 functional antibody.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2.3 Seed 500 μL of the cell suspension into each well of the pre-coated 48-well plate. Incubate at 37°C, 5% CO₂.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e3. Culture Maintenance and Cell Expansion\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3.1 After 48 hours of culture, gently pipette to collect the cell suspension and centrifuge at 300×g for 5 minutes.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3.2 Discard the supernatant, resuspend the cells in fresh complete Treg polarization medium, adjust the cell density to 1×10⁶ cells\/mL, and reseed into new plates for continued culture.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3.3 Thereafter, monitor cell density and morphology under an inverted microscope every 12 hours. If the cell density becomes too high (e.g., \u0026gt;2×10⁶ cells\/mL), perform a half-medium exchange or split the cells into new wells at an appropriate ratio, supplementing with fresh complete Treg polarization medium to maintain optimal cell growth.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e4. Cell Collection\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eOn day 5 of culture, collect the cells and wash once with pre-chilled PBS.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch3 class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eNegative Control (Th0) Setup\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eTo assess polarization specificity, a Th0 negative control should be set up in parallel. The procedure is essentially identical to that of the Treg induction group, with the main difference being the medium used:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eTh0 maintenance medium: RPMI-1640 basal medium supplemented with 10% FBS, 55 μM β-mercaptoethanol, 2 ng\/mL recombinant mouse IL-2, 10 μg\/mL anti-mouse IFN-γ, and 10 μg\/mL anti-mouse IL-4 functional antibody.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eNote: Apart from the difference in medium, cell seeding, medium exchange, and density monitoring are identical to those of the Treg induction group.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch3 class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eFlow Cytometry Analysis\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1. Cell collection: Collect the cells, wash once with PBS, discard the supernatant, and gently resuspend the cells in PBS by pipetting.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2. Cell counting: Count the cells using an automated cell counter to determine the total cell number, centrifuge at 300×g for 5 minutes, and discard the supernatant.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3. Viability dye staining: Add the diluted Fixable Viability Dye 452 at 100 μL per 1×10⁶ cells (refer to the product manual for dilution instructions).\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e4. Cell washing: Wash the cells with PBS, centrifuge at 300×g for 5 minutes, and remove residual viability dye.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e5. Cell fixation: Resuspend the cells in PBS at 1×10⁷ cells\/mL, dispense 100 μL per well into a 96-well plate, centrifuge at 300×g for 5 minutes, and discard the supernatant. Add 200 μL of 1× Fixation\/Permeabilization solution per well and incubate at room temperature protected from light for 15 minutes.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e6. Cell washing: Centrifuge at 300×g for 5 minutes and discard the supernatant. Add 200 μL of PBS per well and centrifuge at 300×g for 5 minutes to wash the cells and remove residual fixative.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e7. Cell permeabilization: Add 200 μL of 1× Permeabilization Buffer per well and incubate at 4-8°C for 30 minutes.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e8. Cell blocking: Add 100 μL of 1× BD Perm\/Wash™ Buffer per well with Mouse IgG for blocking (steps 7 and 8 may be performed simultaneously), then centrifuge at 300×g for 5 minutes and discard the supernatant.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e9. Antibody incubation: Add 100 μL of 10% FBS in PBS per well with PE anti-mouse FOXP3 Recombinant Antibody and CD25 Monoclonal Antibody (BC96), Brilliant Violet™ 421 (refer to the antibody manual for the recommended amount).\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e10. Cell washing: Centrifuge at 300×g for 5 minutes and discard the supernatant. Add 200 μL of PBS per well and centrifuge at 300×g for 5 minutes to wash the cells and remove residual antibodies, then resuspend the cells in 100-200 μL.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e11. Proceed to flow cytometry acquisition.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch3 class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eNotes\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1. For your safety and health, wear a lab coat and disposable gloves during operation. This product is for research use only.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2. Optional medium supplements: 1% sodium pyruvate, L-glutamine, HEPES, and penicillin-streptomycin.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3. Aliquot into individual containers to minimize freeze-thaw cycles.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch3\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eProduct Properties\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003ctable class=\"MsoNormalTable\" border=\"0\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"232\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eItem\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"598\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eSpecification\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"232\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eTag\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"598\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eNo Tag\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"232\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eEndotoxin\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"598\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e\u0026lt; 1.0 EU per μg by the LAL method.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"232\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eReconstitution Method\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"598\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eMouse IL-2 protein: Briefly centrifuge the vial before opening to collect the contents at the bottom. Reconstitute in ultrapure water to a concentration of 0.1-1.0 mg\/mL, which may be further diluted for subsequent experiments. Mouse TGF-β1: Briefly centrifuge the vial before opening to collect the contents at the bottom. Reconstitute in 4 mM HCl to a concentration of 0.1-1.0 mg\/mL, which may be further diluted for subsequent experiments.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003ch3\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eFeatures\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e• Classical gold-standard combination with high polarization efficiency.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e• High-activity quality control with stable lot-to-lot performance.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e• Streamlined operation with a short experimental cycle.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e• Optimized ratios for convenient and reliable use.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch3\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eApplications\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003cdiv style=\"text-align: center;\"\u003e\n\u003cimg src=\"https:\/\/cdn.shopify.com\/s\/files\/1\/0803\/9419\/1166\/files\/13_8efebdd4-0752-4357-9ed1-1daac88680be_480x480.png?v=1789462919\" alt=\"Figure 1. Flow cytometry analysis of Foxp3 and CD25 expression in non-induced (Treg−, left) and induced (Treg⁺, right) mouse CD4⁺ T cells. Treg polarization efficiency (CD25⁺Foxp3⁺): 86.3% (Treg−: 4.12%).\" style=\"margin-bottom: 16px; float: none;\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\n\u003c\/div\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"center\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eFigure 1. Flow cytometry analysis of Foxp3 and CD25 expression in non-induced (Treg−, left) and induced (Treg⁺, right) mouse CD4⁺ T cells. Treg polarization efficiency (CD25⁺Foxp3⁺): 86.3% (Treg−: 4.12%).\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch3\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eStorage\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003ctable class=\"MsoNormalTable\" border=\"0\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eComponent\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eStorage Condition\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eMouse IL-2 Protein\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eMouse TGF-β1 Protein\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eAnti-mouse \u003c\/span\u003eCD3ε \u003cspan\u003emAb\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eNA\/LE Syrian Hamster anti-mouse CD28 mAb\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eAnti-mouse IL-4 Recombinant mAb\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eAnti-mouse IFN-γ Recombinant mAb\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eStore at -25 to -15°C, valid for 1 year upon receipt. Avoid repeated freeze-thaw cycles.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003eβ-Mercaptoethanol\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eStore at 2-8°C.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e","brand":"Yeasen","offers":[{"title":"10 mL","offer_id":54454248538430,"sku":"92678ES10","price":415.0,"currency_code":"USD","in_stock":true},{"title":"100 mL","offer_id":54454248571198,"sku":"92678ES60","price":885.0,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"thumbnail_url":"\/\/cdn.shopify.com\/s\/files\/1\/0803\/9419\/1166\/files\/universe_b9e9ebcb-b5e9-497a-b61d-dc198ade0f05.jpg?v=1754453675","url":"https:\/\/www.yeasenbio.com\/sv\/products\/92678","provider":"Yeasen - Leading Innovation in Molecular Enzymes and Reagents","version":"1.0","type":"link"}